周辉 罗媚 文亦戈 马安迪 罗永忠 易青 陈建华 肖玲

肺癌是最常见的恶性肿瘤，发病率高，生存率低，预后差，居恶性肿瘤死亡率首位[1]。非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）约占肺癌的80%-85%，研究[2]发现慢性炎症与肿瘤发生相关。Toll样受体5（toll-like receptor 5, TLR5）是toll样受体家族中的一员，是一类最具有特征性的模式受体分子，能募集多种配体蛋白，激发信号转导，导致一些特异性转录因子的活化。细菌的鞭毛蛋白（Flagellin）作为TLR5特异性的外源性配体，TLR5与其结合后具有保护性的抗炎作用，其可能在肿瘤异常表达。我们前期研究[3]发现，与正常肺组织比较，TLR5在NSCLC组织中高表达，且与吸烟分化程度呈正相关，但有关TLR5在NSCLC高表达后的信号通路活化情况的研究并不多见。本研究旨在探讨不同NSCLC细胞株中TLR5表达情况，寻找较好的实验模型，并探讨其信号通路活化的机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株 人肺腺癌细胞株SPC-A-1购于中科院上海细胞研究所；人肺腺癌细胞株A549（cat# CCL-185），人肺鳞癌细胞株SK-MES-1（cat# HTB-58）均购自美国菌种保藏中心（American Type Culture Collection, ATCC）。

1.1.2 主要试剂和耗材 DMEM培养基、FBS、胰酶均购自美国ATCC公司；Triton X-100购自美国Genview公司；反转录试剂盒、PCR Mix试剂盒均购自加拿大Fermentas（MBI Fermentas）分子生物技术公司；Tris-Base、10%SDS均购自美国Sigma公司；TEMED购自上海生工生物工程股份有限公司；天然膜蛋白抽提试剂盒ProteoExtractTM（M-PEK）购自德国MERCK公司（中国）；Total protein Extraction试剂盒购自美国ProMab公司；NucBusterTMProtein Exaction Kit购自德国MERCK公司（中国）；Mouse GAPDH antibody、Goat Anti Rabbit IgG/HRP购自美国Santa Cruz生物公司；Rabbit Anti Goat IgG/HRP购自中杉金桥技术有限公司（北京）；Goat Anti Mouse IgG/HRP、Goat Anti Mouse IgG+A+M(H+L)/HRP均购自美国Zymed Laboratories公司；Goat anti-rat IgG-HRP、Rabbit Anti-Sheep IgG/HRP均购自美国Santa Cruz生物技术公司；NF-κB荧光素酶报告基因质粒购自江苏碧云天技术研究所。shRNA空载体pLKO.3G购自Addgene公司；……