缑鸿达 陈丽珍 任芯 王春良 翟锐锐

摘 要：目的 研究五指山绿茶茶多糖的提取工艺与含量测定方法。方法 茶多糖含量测定采用蒽酮-硫酸法；采用水浸提法，以茶多糖提取得率为指标进行正交试验设计，考察对茶多糖提取得率的影响因素。结果 多糖含量测定的线性回归方程为C=6.637 6A-7.249 89，r=0.999 1，线性范围为10.040～100.40μg/mL。最佳提取工艺为加入15倍量的水，90 ℃提取3次，每次180 min。结论 为五指山绿茶提供了稳定可行的茶多糖提取工艺，准确可靠的茶多糖含量测定方法。

关键词：五指山绿茶 茶多糖 提取 含量测定

中图分类号：S571.1 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2015）09（c）-0255-02

五指山绿茶，由于长年生长于云雾里，清香持久，醇香甘甜，养肺润喉，提神醒脑，去除疲劳，防止感冒、解毒通肠等功效。茶多糖（Tea Polysaccharides，TPS）是茶叶中一类与蛋白质结合在一起的酸性多糖或酸性糖蛋白，随原料的老嫩、茶树品种、采摘季节与制作工艺的不同有所差别，一般老叶比嫩叶含量高。现代药理研究表明，茶多糖具有降血糖、防治糖尿病、降血脂、防治心血管疾病等多种功能，同时在抗氧化和增强人体非特异性免疫功能等作用也较显著，是一种很有开发前景的天然资源[1-2]。

为了对茶叶中有效成分进行提取进行综合开发利用，并将其应用到食品、医药等多种领域。因此，在茶叶中分离并提取茶多粮，提高产品的质量，茶叶是一种传统的天然生物资源将其进行综合利用是具有重要意义的。该实验着重研究探讨了影响茶叶中茶多糖提取得率的多种因素，优选出最佳提取工艺条件， 以期为茶叶资源的深度加工和应用提供一定的科学参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试原料

绿茶（市购于海南五指山市茶叶市场）。将茶叶在40 ℃烘箱中干燥，用粉碎机粉碎后过60目筛，得到茶叶细粉末，密封保存备用。

1.1.2 试剂

实验试剂均为分析纯；实验用水均为双蒸水。蒽酮-硫酸试液。

1.1.3 仪器

722S分光光度计。

1.2 茶多糖提取工艺流程

干燥茶叶粉碎 过60目筛子 水浸提

离心4000 r/min 取上清液于容量瓶中定容

蒽酮-硫酸分光光度法测定茶多糖的含量并计算得率。

1.3 正交试验

在单因素试验基础上，对主要提取条件：浸提温度（ 60 ℃、70 ℃、80 ℃）、浸提时间（2 h、3 h、4 h）、料液比（1∶10、1∶15、1∶20 g/mL）、浸提次数（1、2、3次）4个因素设计正交试验，每个因素设定3个水平，选用L9（34）正交表安排试验，优化出茶多糖提取的最佳条件。

1.4 标准曲线的绘制

精确称取无水葡萄糖对照品适量，加双蒸水配成1.004 0 mg/mL的标准溶液。精密移取对照品溶液1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00 mL分别置100 mL容量瓶，各加水至刻度，摇匀。分别精密移取上述标准溶液各2.00 mL置具塞试管中，以2.00 mL双蒸水作空白，每管再加入8 mL蒽酮-硫酸试液（勿沿壁，直接加在液面），立即摇匀，冰水浴中冷却。一起置于沸水浴中加热7 min，然后用冷水迅速冷却，放置10 min后[3-4]，在580 nm处测定吸光度（A）。横坐标为葡萄糖浓度（C），纵坐标为吸光度，得出标准曲线及回归方程。

1.5 茶多糖的制备与测定[1-3]

将从实验中得到的提取液用双蒸水进行适当稀释定容，摇匀，备用。测定时吸取2 mL该稀释液于试管中，然后按1.4中的方法测定吸光度，由回归方程计算茶多糖提取液中葡萄糖浓度。茶多糖得率以如下公式计算：

茶多糖含量（mg/g）=（ C×V×f）/（ W×103）

式中为C：茶多糖提取液中葡萄糖浓度（mg/mL）；V为茶多糖提取物体积（mL）；W为茶叶的质量（g）；f为换算因子。

1.6 方法学考察

1.6.1 稳定性试验

取同一批号样品约2 g，精密称定，按样品溶液的制备与测定方法操作，于580 nm处每隔1 h测定吸光度一次，连续6 h。

1.6.2 精密度试验

取同一批样品约2 g，精密称定，按样品溶液的制备与测定方法操作，于580 nm处连续测定吸光度6次。

1.6.3 重复性试验

取同一批样品约2 g（n=6），精密称定，按样品溶液的制备与测定方法操作，于580 nm处分别测定吸光度值，

1.6.4 加样回收试验

精密称取同一批样品2.0 g，共6份，分别精密加入适量多糖对照品溶液，按照供试品溶液的制备方法操作，于580 nm处分别测定其吸光度。

2 结果与分析

2.1 葡萄糖标准曲线的绘制

葡萄糖标准曲线及回归方程：C=6.6376 A-7.249 89，r=0.999 1，线性范围：10.040～100.40μg/mL。

2.2 正交试验结果

经正交软件对茶多糖提取工艺数据进行分析，所得正交试验分析与方差分析结果表明，4个提取因素对茶多糖得率影响的主次顺序即：次数>时间>温度>料液质量比，其中次数和时间呈显著水平。茶多糖提取的最佳工艺为在90 ℃下，以1∶15的料液质量比，浸提180 min，次数3次，此条件下茶多糖得率为495.65 mg/g。

2.3 验证性实验

经最佳提取工艺条件下平行提取6次，测定得到的吸光度值为0.292、0.292、0.295、0.291、0.293和0.291，计算得到茶多糖含量为501.30 mg/g，其相对标准偏差为0.56%。

2.4 方法学考查

2.4.1 稳定性试验

测定得到的吸光度值为0.291、0.290、0.287、0.286、0.288、0.293和0.294，RSD為1.14%。结果表明该实验提取的多糖溶液较为稳定，放置6h内重现性较好。

2.4.2 精密度试验

测得的吸光度值分别为0.291、0.288、0.289、0.288、0.291和0.290，RSD=0.52% （n=6），结果表明该方法具有较高的精密度。

2.4.3 重复性试验

实验结果表明该方法有较好的重复性，计算多糖平均含量为501.30 mg/g，RSD=0.56%（n=6）。表明该实验方法偶然误差较小，方法可靠。

2.4.4 加样回收试验

结果见表1。6次实验的回收率在94.62%～98.97%之间，平均回收率为95.52%，RSD=1.72%。表明该方法比例系统误差较小，准确度高。

3 结语

目前在测定茶多糖时常用葡萄糖作为标准品，这是由于茶多糖是由6种以上的单糖组成的复合多糖；且提取所得茶多糖成分也不相同，是因为茶的种类、产地、制作方法、发酵工艺等因素的影响，同时也受提取过程中多种因素影响，尤其是料液质量比、时间、温度和次数都会对茶多糖得率造成影响。

从海南五指山产绿茶中分离提取出粗茶多糖，所得最佳提取工艺为：在90 ℃浸提温度下，以1∶15的料液质量比浸提180 min，次数3次，最佳含量为495.65 mg/g。用蒽酮-硫酸法测定茶多糖含量表明，五指山产绿茶中茶多糖含量为501.30 mg/g。经方法学考查实验可知，含量测定方法的重复性、精密度与稳定性均较高，回收率符合要求，可作为茶多糖的含量测定的科学方法。有关五指山产绿茶茶多糖的分离纯化与单糖组成结构，以及相关的生物活性有待深入探讨研究，旨在为茶多糖在医药和食品保健等众多领域的开发利用提供崭新的思路。

参考文献

[1] 崔宏春，余继忠，黄海涛，等.茶多糖的提取及分离纯化研究进展[J].茶叶，2011，37（2）：67-71.

[2] 王黎明，夏文水.葸酮—硫酸法测定茶多糖含量的研究[J].食品科学，2005，26（7）：185-188.

[3] 赵丽平，肖颖，董翠.信阳绿茶中茶多糖提取工艺研究[J].江苏农业科学，2012，40（10）：245-246.