王双双，张俊，杜芳芳，李晓，胡安君，赵雅，王学兵，，张红英，∗

（1.河南农业大学牧医工程学院，郑州450000；2.河南省动物性食品安全重点实验室，郑州450000；3.河南省科高植物天然产物开发工程技术有限公司；郑州450002；4.河南中亚神鹏医药科技有限公司，郑州450061）

连花柴芩可溶性粉解热镇痛止咳祛痰作用的研究

王双双1，张俊1，杜芳芳2，李晓3，胡安君1，赵雅4，王学兵1，2，张红英1，2∗

（1.河南农业大学牧医工程学院，郑州450000；2.河南省动物性食品安全重点实验室，郑州450000；3.河南省科高植物天然产物开发工程技术有限公司；郑州450002；4.河南中亚神鹏医药科技有限公司，郑州450061）

为评价连花柴芩可溶性粉的解热、镇痛、止咳、祛痰作用，采用LPS致大鼠发热法、醋酸致小鼠扭体法、小鼠氨水引咳法、小鼠气管段酚红排泌法，观察连花柴芩可溶性粉的解热、镇痛、止咳、祛痰作用。结果显示，连花柴芩可溶性粉抑制大鼠发热效果显著（P＜0.05）；减少小鼠扭体反应次数（P＜0.05），镇痛率分别为34.81%、32.59%和27.31%；减少小鼠咳嗽次数（P＜0.05），抑制率分别为36.82%、31.48%和20.37%；能增强小鼠对酚红的排泌（P＜0.05）。表明连花柴芩可溶性粉具有明显的解热、镇痛、止咳、祛痰的作用。

连花柴芩可溶性粉；解热；镇痛；止咳；祛痰

连花柴芩可溶性粉是结合银翘散辛凉透表、清热解毒的功效［1-2］和小柴胡汤和解少阳、和胃降逆、扶正祛邪的功效［3］，合理加减、调剂组方，制备而成的粉剂，具有清热泻火、消肿散结、祛风固表的功效，可用于畜禽上呼吸道感染、咽炎、肺炎等疾病的预防和治疗。本试验观察了该药的解热、镇痛、止咳、祛痰作用，为其进一步的临床治疗及新药的申报提供科学依据。

1 材料

1.1 试剂与仪器 脂多糖（LPS，Sigma公司）；冰醋酸（开封开化有限公司试剂厂，国药准字051124304，规格：500 mL）；氯化铵（分析纯，天津市凯德化学试剂有限公司）；酚红（国药集团化学试剂有限公司）。

1.2 药物 中药复方连花柴芩可溶性粉（由河南科高植物天然产物开发工程技术有限公司提供）；双黄连口服液（河南富森药业有限公司生产，国药准字Z41022325，规格：10 mL／支）；阿司匹林肠溶片（神威药业集团有限公司，国药准字H3023716，产品批号1304071，规格：25 mg／片）；醋酸地塞米松片（浙江仙琚制药股份有限公司生产，国药准字H33020822，产品批号140301，规格：0.75 mg／片）；氢溴酸右美沙芬软胶囊（石家庄以岭药业股份有限公司，国药准字H20066348，规格：15 mg／片），临用前用蒸馏水配成所需浓度的混悬液。

1.3 动物 昆明种小鼠，雌雄各半，6～8周龄，体重18～22 g；健康SD大鼠，雌雄各半，6～8周龄，体重200～220 g。均购自郑州大学实验动物中心。

2 方法

2.1 解热试验 据参考文献方法［4］，取200～220 g的SD大鼠，每组10只，雌雄各半。随机分为空白对照组（灌胃生理盐水）；模型组（灌胃生理盐水）；阿司匹林组（0.22 g／kg）；双黄连组（10 mL／kg）；中药复方连花柴芩可溶性粉高、中、低剂量组（1.2 g／kg，0.6 g／kg，0.3 g／kg），灌胃给药0.5 mL／只，每天1次，连续5 d。除空白对照组外，各组于末次给药1 h后，一次性腹腔注射脂多糖（100 μg／kg）0.2 mL／只，随后0.5、1、1.5、2、3、4、5.5、7、9、12 h测量1次体温，连续监测12 h。

2.2 镇痛试验 据参考文献方法［5-6］，取体重18～ 22 g的昆明小鼠，每组10只，雌雄各半，随机分为模型组（灌胃生理盐水）；醋酸地塞米松片组（5 mg／kg）；双黄连组（20 mL／kg）；中药复方连花柴芩可溶性粉高、中、低剂量组（1.6 g／kg，0.8 g／kg，0.4 g／kg），灌胃给药0.5 mL／只，每天1次，连续5 d。末次给药1 h后，腹腔注射0.6%冰醋酸溶液0.2 mL／只，以腹部内凹，躯干与后腿伸张，臀部高起作为产生扭体反应的标准，记录观察5～20 min内小鼠出现扭体反应次数，并按如下公式，计算药物对扭体反应的镇痛率：

2.3 止咳祛痰试验 取体重18～22 g的昆明小鼠，每组10只，雌雄各半，随机分为空白对照组（灌胃生理盐水）；氯化铵组（0.3 g／kg）；右美沙芬组（5.85 mg／kg）；中药复方连花柴芩可溶性粉的高、中、低组（1.6、0.8、0.4 g／kg）；灌胃给药0.5 mL／只，每天1次，连续7 d。

2.3.1 氨水致小鼠咳嗽法 据参考文献方法［7］，末次给药1 h后，吸取浓氨水（浓度为25%～28%）0.5 mL，注入盛有50 mL蒸馏水的小烧杯中，外扣3000 mL的大烧杯，饱和10 min后，将小鼠置于3000 mL的大烧杯内并开始计时，每次1只，观察记录小鼠2 min内的咳嗽次数（小鼠咳嗽时表现以腹肌收缩、张口呼吸、发出典型咳嗽声为指标），按如下公式，计算咳嗽的抑制率，以此评价药物的止咳效果：

2.3.2 小鼠气管段酚红法［8］用分析天平称取酚红25 mg置250 mL的容量瓶中，加蒸馏水溶解，分别精密吸取1、2、3、4、5、6 mL置10 mL容量瓶中，加蒸馏水定溶，再分别吸取0.5 mL置10 mL带塞试管中，加2 mol／L NaOH 5 mL摇匀，于分光光度计546 nm处检测OD值。以酚红浓度为横坐标，OD值为纵坐标，根据酚红浓度和OD值计算出回归方程，绘制酚红标准曲线。

末次给药30 min后，腹腔注射0.5%酚红生理盐水溶液0.5 mL，注射后30 min，处死小鼠，剪取气管，将各气管段放入预先盛有4 mL 5%NaHCO3溶液试管中，静置1 h，后于分光光度计492 nm处测OD值，置4℃存放24 h后，重测OD值，取二者平均值，根据回归方程计算出酚红的含量。

2.4 统计学处理 应用SPSS10.0 for Windows统计分析软件进行处理，实验数据用平均值±标准差（±s）表示，用t检验进行两两比较，P＜0.05差异显著，有统计学意义。

3 结果与分析

3.1 中药复方连花柴芩可溶性粉的解热作用 结果见表1，注射LPS后，0.5、1 h各给药组大鼠体温变化不大；1 h后模型组体温开始持续升高，12 h后温度开始恢复正常。其中，中药复方连花柴芩可溶性粉的高剂量、中剂量组的体温变化整体水平最低，且变化平稳，与模型组比较，在不同时间点1、1.5、3、4、5.5、7、9 h差异有统计学意义（P＜0.05），降温效果与阿司匹林组相近，比双黄连组好；低剂量组在1、4、9 h时，与模型组相比，有显著性差异（P＜0.05），降温效果不如阿司匹林组、双黄连组。

表1 连花柴芩可溶性粉对LPS致大鼠发热的影响体温／℃（±s）

表1 连花柴芩可溶性粉对LPS致大鼠发热的影响体温／℃（±s）

与模型组比较，同列字母不同表示差异显著（P＜0.05）

处理／h空白对照组模型组阿司匹林组双黄连组高剂量组中剂量组低剂量组0.537.5±0.427a37.9±0.385ab37.8±0.185ab37.5±0.272ab37.7±0.245ab38.0±0.582b37.8±0.185ab 137.3±0.219a38.6±0.223d37.3±0.397a37.5±0.533ab37.3±0.397a37.7±0.588abc37.9±0.089bc 1.537.6±0.290a39.1±0.183d37.8±1.015ab38.2±0.366bc38.3±0.549bc38.4±0.207c39.0±0.470d 237.6±0.354a39.0±0.602c38.1±1.077ab38.1±0.385ab38.4±0.462bc38.8±0.562c38.9±0.189c 337.6±0.488a39.3±0.669c39.3±0.669c39.3±0.669c38.2±0.523ab38.3±0.417b39.0±0.286c 437.6±0.103a39.5±0.606d38.0±0.864ab38.1±0.791abc38.5±0.253bc38.7±0.432bc38.7±0.423c 5.538.2±0.232a39.4±0.393c38.5±0.767ab38.5±0.184ab38.4±0.297a38.4±0.261a39.0±0.557bc 738.7±0.240ab39.6±0.508c38.5±0.894a39.1±0.207bc38.5±0.517a38.5±0.303a39.5±0.412c 938.7±0.232ab39.4±0.390c38.5±0.513a38.9±0.232ab38.6±0.320ab38.6±0.151ab39.0±0.293b 1238.0±0.526a37.7±0.475a37.7±0.471a37.5±0.443a37.7±0.483a37.5±0.628a37.7±0.325a

3.2 中药复方连花柴芩可溶性粉的止痛效果 结果见表2，各给药组都有抑制小鼠扭体反应的作用，使小鼠的扭体次数明显减少，与模型组相比，复方连花柴芩可溶性粉的高、中、低剂量组差异显著（P＜0.05），其高剂量组的镇痛效果最好，镇痛率达34.81%，优于地塞米松组和双黄连组。

表2 连花柴芩可溶性粉对醋酸致小鼠扭体反应的影响（±s）

表2 连花柴芩可溶性粉对醋酸致小鼠扭体反应的影响（±s）

与模型组比较，同列字母不同表示差异显著（P＜0.05）

组别镇痛率／%20 min内扭体数

3.3 中药复方连花柴芩可溶性粉的止咳效果 结果见表3，复方连花柴芩可溶性粉对氨水致小鼠咳嗽具有明显的止咳作用，与空白对照组相比，复方连花柴芩可溶性粉高、中、低剂量组、右美沙芬组都有显著性差异（P＜0.05），能够显著减少咳嗽次数；高、中剂量组抑制率达36.82%和31.48%，高、中剂量组止咳效果与右美沙芬组相当。

表3 连花柴芩可溶性粉对氨水致小鼠咳嗽的影响（±s）

表3 连花柴芩可溶性粉对氨水致小鼠咳嗽的影响（±s）

与空白对照组比较，同列字母不同表示差异显著（P＜0.05）

组别抑制率／%2 min内咳嗽次数空白对照组—55.67±6.89d右美沙芬组28.4539.83±6.21ab高剂量组36.8235.17±3.31a中剂量组31.4838.33±4.23a低剂量组20.3744.33±1.97bc

3.4 中药复方连花柴芩可溶性粉的祛痰作用

3.4.1 根据酚红浓度和OD值绘制的酚红标准曲线，结果见图1。并根据如图所示的回归方程计算小鼠气管酚红的排泌量。

图1 酚红标准曲线图

3.4.2 结果见表4，复方连花柴芩可溶性粉能够加速小鼠气管段酚红的分泌，与空白对照组相比，高、中剂量组、氯化铵组均有显著性差异（P＜0.05），其中高剂量组效果最好。

表4 连花柴芩可溶性粉对小鼠气管段酚红分泌量的影响（±s）

表4 连花柴芩可溶性粉对小鼠气管段酚红分泌量的影响（±s）

与空白对照组比较，同列字母不同表示差异显著（P＜0.05）

组别OD值酚红分泌量空白对照组0.1006±0.0277a0.7095±0.2670a氯化铵组0.1499±0.0603bc1.1837±0.5808bc高剂量组0.1805±0.0560c1.4785±0.5389c中剂量组0.1569±0.0389bc1.2516±0.3746bc低剂量组0.1338±0.0446ab1.0288±0.4292ab

4 讨论

连花柴芩可溶性粉根据中医辨证论治原则，采用“疏散肺卫风热、清解气分高热、调和营卫”的总体治疗原则，由连翘、金银花、柴胡、黄芪和竹叶等多种中药材配制而成。本研究根据该药的功能进行了解热、镇痛、止咳祛痰等药效学试验，设置高、中、低三个剂量组，为新药研发提供数据支持。

文献报道，外源性致热因子LPS是一种有代表性的细菌致热原，作用机体可激活产生和释放内源性致热源细胞，引起体温调定点上移，产热增加，散热减少，使体温升高［9］。LPS诱导的发热模型，伴有精神萎靡，轻微腹泻等症状。试验结果显示，与模型组比较，各给药组均有不同程度的降低作用，其中，中药复方连花柴芩可溶性粉高剂量、中剂量组的体温变化整体水平最低，在七个时间点均低于模型组，差异显著（P＜0.05），降温效果与阿司匹林组相近，比双黄连组好。说明连花柴芩可溶性粉具有对抗外源性致热因子引起机体发热。

镇痛试验中，腹膜有广泛的感觉神经分布，将醋酸注射小鼠腹腔，引起腹腔深部大面积较持久的疼痛刺激，致使小鼠产生“扭体反应”，通过扭体次数和镇痛率来判定药物的镇痛作用。结果显示，连花柴芩可溶性粉三个剂量对醋酸致小鼠腹部疼痛具有明显的抑制作用，与模型组相比差异显著（P＜0.05），作用呈剂量依赖关系，高剂量组作用效果最好，优于地塞米松组、双黄连组。说明连花柴芩可溶性粉具有对抗化学性刺激引起机体疼痛的作用。

目前研究发现，有多种因素能引起咳嗽［10］。本研究止咳试验中，采用化学物质氨水刺激小鼠呼吸道粘膜上的感受器引起咳嗽。祛痰试验中，用指示剂酚红给小鼠腹腔注射后，可部分地由支气管排泄，制成祛痰模型。试验结果表明，连花柴芩可溶性粉高、中剂量组，与空白对照组比较，都有显著性差异（P＜0.05），且高剂量组止咳、祛痰效果最好，优于氯化铵组、右美沙芬组，中剂量组效果与氯化铵组、右美沙芬组相似，表明中药复方连花柴芩可溶性粉具有止咳祛痰的作用。

连花柴芩可溶性粉以清热解毒与和解少阳，阻断病情发展，祛邪外出［11］。与孟庆娟［12］报道中药复方灌注剂的镇痛效果，刘涛等［13］报道消炎利胆口服液的镇痛效果相似，但解热效果不如连花柴芩可溶性粉效果明显；与梁祝［7］报道白沙颗粒的止咳效果相似，祛痰效果不如连花柴芩可溶性粉有优势；与金晓玲［14］报道佛手醇提取液的祛痰作用相似，但该方是以中药为原料制成的纯中药复方新剂型，便于生产和储存，成本低，试验表明其可以对抗不同因素引起的炎症，且无不良反应，作用效果明显，值得开发与投入应用。本研究通过解热、镇痛、止咳、祛痰等指标探讨了连花柴芩可溶性粉的主要药效作用，为其作为新药研发及进一步的临床试验提供了科学依据。

［1］ 陈巧谋，黄礼杰，王炜.银翘散的临床应用与药理实验研究［J］.湖南中医药导报，2003，9（9）：37-39.

［2］ 唐黎明，宋海林.银翘散的现代应用及研究进展［J］.中外医疗，2010，29（11）：133-134.

［3］ 张保国，李昌勤，刘庆芳.小柴胡汤现代药效学研究［J］.中成药，2010，32（4）：648-651.

［4］ 杨勇，容蓉，卢兖伟，等.四物汤及其各单味药对小鼠自由基代谢及免疫功能影响的比较研究［J］.山东中医药大学学报，2002，26（4）：299-300.

［5］ 吴丽霞，吴铁松，郑敏.陆英煎剂对小鼠镇痛作用的实验研究［J］.今日药学，2012，22（8）：481-483.

［6］ 周家茂，严奉祥，全建设.活络健骨胶囊镇痛试验的药效学研究［J］.中国中医药信息杂志，2006，13（4）：25-27.

［7］ 梁祝，张永萍，曹国琼，等.白沙颗粒镇咳、祛痰、平喘的实验研究［J］.贵阳中医学院学报，2012，34（3）：20-22.

［8］ 肖佳音，陈志英，马辉.石川化痰散祛痰镇咳作用的实验研究［J］.中医药学报，2011，39（3）：41-42.

［9］ 蒋玉凤，张丹卉，黄启福，等.清开灵对内毒素性发热家兔解热机制研究［J］.中医药实验研究，2003，26（5）：53.

［10］Irwin R S，Madison J M.The diagnosis and treatment of cough［J］.The New England Journal of Medicine，2000，343（23）：1715-1721.

［11］邓海英，江珍玉，康四和.柴芩双解颗粒药效学研究［J］.数理医药学杂志，2009，22（1）：70-71.

［12］孟庆娟，冯士彬，李志明，等.中药复方灌注剂治疗奶牛乳房炎的药效与应用安全性研究［J］.湖北农业科学，2011，50（9）：1846-1850.

［13］刘涛，王红丽，宋京都，等.消炎利胆口服液解热镇痛实验研究［J］.中国医药导刊，2009，11（8）：1350-1351.

［14］金晓玲，徐丽珊，何新霞.佛手醇提取液的药理作用研究［J］.中国中药杂志，2002，27（8）：604-606.

（编辑：陈希）

Study on Antipyretic，Analgesic，Antitussive and Expectorant Effects of Lian-hua-chai-qin Soluble Powder

WANG Shuang-shuang1，ZHANG Jun1，DU Fang-fang2，LI Xiao3，HU An-jun1，ZHAO Ya4，WANG Xue-bing1，2，ZHANG Hong-ying1，2∗
（1.College of Animal Science and Veterinary Medicine，Henan Agricultural University，Zhengzhou 450000，China；2.Key laboratory for Animal-derived Food Safety of Henan Province，Zhengzhou 450000，China；3.Henan Plant Natural-products Development Engineering Technology Company，Zhengzhou 450002，China；4.Henan Zhong-ya-shen-peng Pharmaceutical technology Company，Zhengzhou 450061，China）

To study the antipyretic，analgesic，antitussive and expectorant effects of Lian-hua-chai-qin Soluble Powder（LHCQSP）to provide reasonable experimental reference for clinical.The antipyretic activity was evidenced in fever rats induced by LPS.Analgesic activity was tested in mice induced by acetic acid.Antitussive effect was examined in mice induced by ammonia，the tracheal phenol red secretion test in mice was for expectorant activity.LHCQSP obviously depressed the temperature of fever rats（P＜0.05），decreased twist times of mice by 34.81%，32.59%and 27.31%，respectively（P＜0.05），reduced cough times of mice by 36.82%，31.48%and 20.37%，respectively（P＜0.05），increased the amount of secreting phenol red（P＜0.05）.This experiment shows that LHCQSP possess antipyretic，analgesic，antitussive and expectorant effects in model animal.

Lian-hua-chai-qin Soluble Powder；fever；ache；cough；phlegm

2015-03-08

A

1002-1280（2015）05-0027-05

S853.76

王双双，硕士研究生，从事中药免疫调节作用方面研究。

张红英。E-mail：hongyingnd＠163.com