梁泽华，李范珠，杨元宵，翁锦妮，许梦捷，徐姗姗

(浙江中医药大学 药学院，浙江 杭州 310053)



附子细辛、芍药甘草配伍前后对小鼠镇痛作用研究

梁泽华，李范珠，杨元宵，翁锦妮，许梦捷，徐姗姗

(浙江中医药大学 药学院，浙江 杭州 310053)

目的：研究附子细辛、芍药甘草配伍前后对小鼠镇痛作用的影响。方法：镇痛实验采用小鼠热板法和扭体法，观察附子细辛、芍药甘草配伍前后对小鼠的镇痛作用。结果：对热板所致疼痛的影响：给药前，生理盐水组、附子组、附子细辛组、芍药组、芍药甘草组四组小鼠的痛阈值比较差异无统计学意义(P>0.05)。给药15、30、60、90min时附子细辛组小鼠痛阈值较附子组均显著提高，芍药甘草组较芍药组均显著提高，差异均有统计学意义(P<0.05)。对醋酸所致疼痛的影响：附子细辛组与附子组相比，芍药甘草组与甘草组相比，小鼠发生扭体反应的潜伏时间均显著延长，在15min内的扭体发生次数明显减少，差异均有统计学意义(P<0.05)；附子细辛组扭体抑制率>附子扭体组抑制率，芍药甘草组抑制率>芍药组扭体抑制率。结论：相比与配伍前，附子细辛配伍后镇痛作用增强，芍药甘草配伍后镇痛作用亦增强。

附子细辛；芍药甘草；配伍；热板法；扭体法；镇痛

附子是毛茛科乌头属植物乌头(AconitumcarmichaeliDebx.) 的干燥子根加工品[1]，能回阳救逆、补火助阳、散寒止痛；细辛能解表散寒、祛风止痛、通窍、温肺化饮。两者均有止痛功效。附子细辛汤出自《伤寒论》，为临床常用方剂，现代药理研究证实其具有抗炎、镇痛、免疫调节等作用，其他作用如清除身体局部产生的活性氧[2]。近年来，该药新的治疗用途也不断被挖掘出来，如治疗顽固性失眠[3]、抖动症[4]等。芍药酸寒，能养血敛阴、柔肝止痛；甘草性温，能健脾益气、缓急止痛。二药相伍，酸甘化阴，调和肝脾，有柔筋止痛之效。芍药甘草汤源自于张仲景《伤寒论》，由芍药、甘草两味药组成，有柔肝舒筋、缓急止痛之功效，其化学成分和药理学的研究已有较多报道[5]。

已有相关文章说明附子细辛和芍药甘草有抗炎镇痛的作用，而镇痛作用虽经过报道，但是较少有明确的试验予以证实。本实验用经典的热板法和醋酸扭体法来研究附子细辛和芍药甘草两个药对配伍前后对小鼠镇痛作用的影响，现报道如下。

1 材料与仪器

1.1 材料

附子、细辛均由浙江中医药大学中医门诊部购得，经浙江中医药大学资源鉴定教研室熊耀康教授鉴定；实验动物为清洁级健康成年ICR小鼠，体重(20±2)g，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动物生产许可证：SCXK(沪)2013-0016；饲养于浙江中医药大学动物实验研究中心，实验动物使用许可证号：SYXK(浙)2013-0184。温度(22±2)℃，湿度50%～60%，12h光照，自由饮水，标准普通饲料喂食。

1.2 仪器

智能热板仪，YLS-6B，山东省医学科学院设备站；电子计价秤，ACS-3型，杭州友恒称重设备有限公司。

2 方法

2.1 药物配制

采用常规煎煮法，称取附子10g、细辛20g，加12倍量蒸馏水用文火煎煮45min，滤过得到滤液①，滤渣再加入10倍量蒸馏水用文火煎煮45min，滤过得到滤液②。合并滤液①和②，静置去渣，用旋转蒸发仪浓缩为60%的水煎液。此为样品1。称取白芍10g，甘草10g，按上述方法制备，此为样品2。称取附子10g，按上述方法制备，此为样品3。称取白芍10g，按上述方法制备，此为样品4。

2.2 造模方法

2.2.1 热板法致痛模型 将雌性小鼠置于温度设定为55.0℃的智能热板仪上，以小鼠出现舔后足所需时间作为小鼠的痛阈值[6]；给药方式为灌胃，给药剂量0.2mL/10g。测量小鼠给药前以及给药后15、30、60、90min的痛阈值(超过60s的以60s计)，记录数据。

2.2.2 扭体法致痛模型 6%醋酸溶液腹腔注射，引起深的、大面积而持久的疼痛刺激，致使小白鼠产生“扭体”反应，腹部内凹、躯干与后腿伸张、臀部高起。给药剂量为0.2mL/10g，分别给药20min后，注射6%醋酸溶液0.2mL/10g[8]，记录15min内小鼠出现扭体反应的潜伏时间及其扭体次数。

2.2.3 分组处理 将实验用的50只清洁级雌性ICR小鼠随机分为附子组、附子细辛组、芍药组、芍药甘草组、空白对照组共5组，每组10只。

2.3 统计学方法

3 结果

3.1 药对配伍前后对热板法所致小鼠疼痛作用的影响

根据表1和图1所示，给药前，空白对照组与附子组、附子细辛组、芍药组、芍药甘草组四组小鼠的痛阈值比较无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比，给药15min时附子组、附子细辛组、芍药组、芍药甘草组痛阈值明显升高，有统计学意义(P<0.05)，附子细辛组、芍药甘草组痛阈值极显著性升高(P<0.01)；给药30min时附子组、附子细辛组、芍药组、芍药甘草组痛阈值均明显升高，有统计学意义(P<0.05)，附子细辛组、芍药甘草组痛阈值极显著性升高(P<0.01)；给药60min时附子组、附子细辛组、芍药组、芍药甘草组痛阈值明显升高(P<0.05)，附子细辛组、芍药甘草组痛阈值极显著性升高(P<0.01)，均有统计学意义；附子细辛组较附子组显著提高，芍药甘草组较芍药组显著提高(P<0.05)。给药90min时附子组、附子细辛组、芍药组、芍药甘草组痛阈值均极显著性升高，有统计学意义(P<0.01)；附子细辛组较附子组显著性提高，芍药甘草组较芍药组显著性提高(P<0.05)。在不同时间段，附子组、与附子细辛组痛阈值相比，芍药组与芍药甘草组痛阈值相比，均无统计学意义(P>0.05)。结果说明附子细辛和芍药甘草药对配伍后对镇痛作用有所提高。

表1 药对配伍后对小鼠镇痛作用的影响 (±s，s)

注：和空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

3.2 药对配伍前后对醋酸扭体法所致疼痛的作用影响

根据表2和图2、3结果所示，与空白对照组相比，附子组、附子细辛组、芍药组、芍药甘草组给药后小鼠发生扭体反应(腹部收缩内凹，后肢伸展，臀部抬高，蠕动)的潜伏时间极显著性延长(P<0.01)，在15min内的扭体发生次数极显著性减少(P<0.01)，附子细辛组较附子组结果相比，潜伏时间显著延长，扭体发生次数显著减少(P<0.05)，芍药甘草组较芍药组结果相比，潜伏时间显著延长，扭体发生次数显著减少(P<0.05)，均有统计学意义，见图2、图3。附子细辛组扭体抑制率>附子扭体组制率，芍药甘草组抑制率>芍药组扭体抑制率，同见图2。结果说明附子细辛和芍药甘草药对配伍后对镇痛作用有所提高。

图1 各药对配伍前后对小鼠镇痛作用的影响

表2 药对配伍后对小鼠醋酸扭体法镇痛作用的影响 (±s)

注：与空白对照组比较，**P<0.01。

图2 药对配伍后对小鼠醋酸扭体法镇痛作用的影响

注：扭体抑制率[7](%)=(空白组扭体反应次数-给药组扭体反应次数)/空白组扭体反应次数*100%。

图3 药对配伍后对小鼠醋酸扭体法镇痛作用的影响

4 讨论

就功效而言，附子能回阳救逆、补火助阳、散寒止痛；细辛能解表散寒、祛风止痛、通窍、温肺化饮,两者均有止痛功效，遂选取附子细辛作药对。附子细辛为临床常用药材，现代药理研究证实其具有抗炎作用、镇痛作用、免疫调节作用，其他作用如清除身体局部产生的活性氧。从实验结果看，药对的抗炎镇痛作用比附子单药作用强，可能是由于附子细辛通过配伍相互产生协同增效作用而提高疗效。白芍味苦酸而性微寒，可养血调经、柔肝止痛、敛阴止汗；炙甘草味甘而性平，可益气补中、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛。二药配伍，甘苦相合而气血双补，酸甘化阴而滋阴液，共奏补益和中、柔肝缓急、解痉镇痛等功效。现代研究表明，中药白芍所含的主要成分白芍苷，可与甘草产生协同作用，显著抑制胃肠道平滑肌及骨骼肌收缩，对全身各部位肌肉强烈收缩所致的痉挛性疼痛具有明显的缓解作用。现代药理研究证实，芍药甘草药对具有抗炎镇痛的作用。从实验结果看，药对的抗炎镇痛作用比芍药单药作用强，这是由于芍药甘草通过配伍相互产生协同增效作用从而提高疗效。

本研究表明，与空白对照组相比，附子组、附子细辛组、芍药组、芍药甘草组小鼠发生舔后足跳跃反应的痛阈值显著升高，小鼠发生扭体反应的潜伏时间明显延长，次数显著降低；附子细辛组相对附子组痛阈值升高，扭体反应的潜伏时间明显延长，次数显著降低；附子细辛组比附子组镇痛作用强；芍药甘草组相对芍药组痛阈值升高，芍药甘草组比芍药组镇痛作用强。为其综合开发利用提供了实验依据，其镇痛有效成份及机制有待进一步研究。

综上所述，附子细辛药对抗炎镇痛作用比附子单药作用强，可能是因为附子细辛通过配伍相互产生协同增效作用从而提高疗效。二药表里兼顾，阳复表解，在内之寒附子温之细辛助之，在外之寒细辛疏之附子辅之，加强温阳解表、散寒止痛功效，为止痛药对。芍药甘草药对抗炎镇痛作用比芍药单药作用强，这是因为芍药甘草通过配伍相互产生协同增效作用而提高疗效。二药配伍结合，能够加强解痉、抗炎止痛之功效，为止痛药对。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].第1部.北京:中国医科技出版社,2010.

[2] 王艳宏,包蕾,刘振强,等.麻黄附子细辛汤药理作用研究进展[J].时珍国医国药,2010,21(1):216-217.

[3] 刘国华,林大勇,关庆增,等.麻黄附子细辛汤新用及机理探讨[J].辽宁中医杂志,2008,35(6):913-914.

[4] 金树武.麻黄附子细辛汤治疗抖动症[J].中外健康文摘,2007,4(4):62-63.

[5] 项琪,程刚,陈济民.芍药甘草汤在大鼠体内药代动力学研究[J].中国药学杂志,2000,35(9):615-618.

[6] 黄礼德,郭立强,潘廷啟,等.半边莲不同提取物镇痛抗炎作用[J].医药导报,2012,31(8):982-985.

[7] 付远清,陆海鹏,陆翠林.星宿莱水提取物及醇提取物毒性及抗炎镇痛作用初探[J].黑龙江医学,2013,37(2):157-159.

[8] 张玲莉,韩瑞玲.酮洛芬二元醇质体凝胶抗炎镇痛作用考察[J].中国药师,2013,16(10):1537-1539.

(责任编辑：尹晨茹)

Study on Effects of the Separated and Integrative Decoction of Aconite and Asarum or Paeonia Lacliflora and Glycyrrhiza on Analgesia in Mice

Liang Zehua,Li Fanzhu,Yang Yuanxiao,Weng Jinni,Xu Mengjie,Xu Shanshan

(College of Pharmacy,Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053,China)

Objective:Research analgesic effect of Aconite and Asarum or paeonia lacliflora and glycyrrhiza in mice before and after combination.Methods:Hot-plate procedure and writhing test in mice were adopted in experimental analgesic mod-el,survey analgesic effect of Aconite and Asarum or paeonia lacliflora and glycyrrhiza in mice before and after combination.Results:the influence of the hot plate induced pain: before dosing, the pain threshold of saline group, aconite group,aconite and asarum group,paeonia lacliflora group,paeonia lacliflora and glycyrrhiza group were not statistically significant (P>0.05). When administered 15min,30min,60min and 90min,the pain threshold of aconite and asarum group increased pain than aconite group(P<0.05), the pain threshold of paeonia lacliflora and glycyrrhiza group increased pain than paeonia lacliflora group(P<0.05), which is statistically significant.The influence of the Combined decoction and decoction on pain induced by acetic acid:The aconite and asarum group compared with aconite group,The paeonia lacliflora and glycyrrhiza group compared with paeonia lacliflora group,combined group of mice was significantly longer occur writhing latency (P<0.05), within 15min, the number of writhing occurred has significantly reduced (P<0.05), which is statistically significant. Inhibition rate of aconite and asarum grouP> Inhibition rate of aconite group,Inhibition rate of paeonia lacliflora and glycyrrhiza grouP>Inhibition rate of paeonia lacliflora group.Conclusion:This study showed that, compared with the separation,the combination of aconite and asarum and the combination of paeonia lacliflora and glycyrrhiza group have the stronger analgesic effect.

Aconite and Asarum;Paeonia Lacliflora and Glycyrrhiza; Hot Plate Test;Body Torsion Test; Analgesic Effect

2014-12-10

浙江省科技厅项目(2012R10044-04)

梁泽华(1976-)，女，博士，浙江中医药大学副教授，研究方向为中药炮制技术与药效结合技术。

R285.5

A

1673-2197(2015)10-0013-03

10.11954/ytctyy.201510006