周松林，赵焕阁，林映莹，黄用豪

(1.海南医学院 热带病重点实验室，海南 海口571101； 2.南京师范大学 生命科学学院，江苏 南京 210046)



小果酸浆总苦味素对慢性皮炎的治疗作用及机制研究

周松林1,2，赵焕阁1，林映莹1，黄用豪1

(1.海南医学院 热带病重点实验室，海南 海口571101； 2.南京师范大学 生命科学学院，江苏 南京 210046)

目的：探讨海南小果酸浆总苦味素(Total Physailins of Physalis minima, TPPM)对小鼠慢性皮炎/湿疹的防治作用。方法：采用5%二硝基氯苯(2, 4-dinitrochlorobenzene, DNCB)外涂于小鼠背部致敏，5天后用0.1% DNCB 于小鼠右耳内侧反复激发，每周3次，共5周，引起慢性皮炎模型，给药组于激发后涂抹TPPM。结果：用药5周后，TPPM能明显减轻鼠耳肿胀度，减少结痂动物数及浸润炎症细胞数，且能降低小鼠血清中升高的IgE水平以及升高血清中降低的IL-2水平。结论：TPPM能有效抑制小鼠慢性皮炎、湿疹，其作用机制可能与降低IgE水平以及升高IL-2水平有关。

慢性皮炎；湿疹；小果酸浆总苦味素

过敏性皮炎(Atopic Dermatitis，AD)是一种慢性皮肤炎性疾病，为临床常见病、多发病，易复发，现发病呈上升趋势[1]。其临床特征表现为皮肤出现瘙痒、红斑、水疱，后期出现皮肤干燥、苔藓样硬化、脱屑等[1-2]。现在主要采用H1受体拮抗剂、糖皮质激素等进行局部或全身药物治疗，但由于其副作用使其应用受到限制[3-5]。酸浆(Physalis alkekengi)为茄科植物酸浆属的干燥宿萼或带果实的宿萼[6]，始载于《神农本草经》，名酸酱，其后历代本草多有收载，明·李时珍《本草纲目》中记载灯笼草利湿除热、清肺治咳、利湿化痰、治疽，《本草纲目拾遗》[7]中云：“灯笼草，……经霜乃红，京师呼为红姑娘。按此草主治虽多，惟咽喉是其专治，用之功最捷。……性寒、治咽喉肿如神。”我国酸浆属约5种，南北均产，海南1种，即小果酸浆(Physalis minima)，海南低海拔地区常见，生于旷野、荒地及路旁等处[8]。酸浆全草含有酸浆苦味素A-T(Physailin A-T)等苦味素类化合物、黄酮类以及甾醇类化合物等[9-13]。海南黎族民间常利用小果酸浆治疗小孩湿疹，为更准确地反映小果酸浆对慢性皮炎/湿疹的药物治疗作用，本文采用二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene, DNCB)反复刺激小鼠耳部建立慢性皮炎/湿疹模型[14]，并观察了小果酸浆总苦味素对慢性皮炎/湿疹的治疗作用，现报道如下。

1 材料与试剂

1.1 试剂与药品

二硝基氯苯(北京市兴津化工厂，分析纯，批号20120402)；氢化可的松注射液(predisone,西安利君制药股份有限公司，批号120709)；小果酸浆总苦味素(Total Physailins of Physalis minima, TPPM,本试验室自行提取)；小鼠血清IL-2、Ig E ELISA试剂盒(南京凯基生物有限公司)，丙酮、二甲亚砜(国产分析纯)。

1.2 试验动物

昆明种小鼠，清洁级，海南医学院动物室提供，8周龄，体重16～18g。

2 方法

2.1 分组与给药[14]

实验前7天，购买昆明种小鼠适量(饲养条件：温度(25±1)℃，湿度(40±5)%，自由进食饮水，SPF条件)，随机分成6组：正常对照组、模型组、阳性药物控制组(氢化可的松组 pre 5mg/kg)、TPPM 30mg/kg、60mg/kg和120mg/kg组。实验前一天剔除小鼠背部和腹部两侧的毛发。DNCB用丙酮/花生油(3∶1) 溶解配制，氢化可的松用二甲亚砜/95%乙醇/花生油(5∶3∶92)溶解配制，TPPM用丙酮/乙醇/无菌双蒸水(1∶1∶1)溶解配制。实验0天，用50μL 5% DNCB刺激小鼠腹部两侧皮肤，分别用10μL 5% DNCB刺激小鼠的背部和右耳，实验第5天，继续用同样剂量的0.1%DNCB刺激小鼠的腹部两侧、背部和右耳；共5周，每周3次，每次刺激后1h，阳性药控组口服给药5mg/kg的氢化可的松，各用药组于致敏当天给予灌胃给药，每天1次，正常对照组和模型组灌以等体积的丙酮/乙醇/无菌双蒸水。

2.2 小鼠左右耳重量差及病理组织切片

末次激发后24h处死实验动物，用直径8mm的金属打孔器在耳中部打孔，用电子天平称得每个组织块重量，计算左右耳重量差。同时将右耳片泡在10%的福尔马林中过夜，然后制成石蜡块，HE染色，光学显微镜下观察。

2.3 小鼠血清中IL-2、Ig E值检测

小鼠经眼球摘除取血1mL，1 500rmp离心20min，取出血清置于微量离心管内，80℃冰箱保存备用，采用放射免疫测定法测定血清IL-2、Ig E值，步骤按IL-2与Ig E试剂盒说明进行。

2.4 统计学方法

3 结果

3.1 对小鼠两耳质量差异的影响

各组小鼠右耳都出现了不同程度的增厚及肿胀，其中阳性对照组肿胀最为明显，三泡草组、氢化可的松组小鼠耳片质量与阳性对照组比较，差异具有统计学意义(P≤0.05)。具体见表1。

表1 各组小鼠左右耳朵质量差异及小鼠血清中Ig E与IL-2含量比较 (±s)

3.2 对小鼠右耳病理变化的影响

阳性对照组小鼠鼠耳表皮角化过度，表皮增厚，真皮层大量炎性细胞浸润，真皮血管明显扩张；TPPM和Pre组表皮轻度角化，表皮稍增厚，真皮层炎性细胞浸润较阳性对照组明显减少(见图1)。

3.3 对小鼠血清中Ig E与IL-2含量变化的影响

与正常对照组相比，模型组小鼠血清中Ig E明显升高，IL-2含量降低，而TPPM(30、60和120mg/kg)和Pre 5mg/kg组能有明显降低小鼠血清中Ig E上升情况，升高小鼠降低的IL-2水平，具体数据见表1与图2。

图1 光学显微镜下观察小鼠右耳组织病理变化情况(HE染色，×200)

注：a: 正常组；b: 模型组；c: pre 5mg/kg group；d:TPPM 30mg/kg；e: TPPM 60mg/kg；f: TPPM 120mg/kg。

图2 各组小鼠血清中Ig E与 IL-2的含量变化

4 讨论

慢性皮炎是一种慢性免疫性皮肤疾病，是发生在皮肤上的一种Ⅳ型变态反应，是由T细胞介导的细胞免疫，正常情况下T细胞活化后产生的TH1细胞和TH2细胞处于动态平衡，而且TH1细胞与TH2细胞通过分泌不同细胞因子彼此相互抑制。但在许多复杂因素的刺激下, TH1细胞与TH2细胞失去平衡，越来越多的研究结果显示湿疹患者外周血和皮损中TH2/TH1细胞亚群失衡，TH2细胞功能亢进，皮损和外周血TH2细胞表达或分泌的IL-4、IL-5和IL-13水平升高，从而导致血清中Ig E上升；而TH1细胞表达或分泌的IFN-γ和IL-2降低[15-16]。本实验也证实了小鼠慢性皮炎/湿疹模型中血清Ig E急剧上升以及IL-2的水平下降，同时TPPM对抑制小鼠慢性皮炎也有一定作用。

酸浆全株含有丰富的苦味素及黄酮类物质[9-13]，也有不少报道其成分具有抗过敏及抗炎症活性[17-19]，之前我们报道小果酸浆乙醇粗提物具有一定的抑制小鼠皮炎的作用[20]，但效果不是很明显，本次试验通过对小果酸浆总苦味素分离，再测定其对小鼠慢性皮炎/湿疹的作用，结果表明苦味素对TH细胞某些细胞因子有一定的作用，TPPM通过抑制血清中Ig E升高，并促进已经降低的IL-2含量增加，从而使TH1/ TH2细胞分泌的细胞因子重新处于平衡状态来抑制炎症作用的发生。综上所述，TPPM能够明显减轻由DNCB诱导昆明种小鼠产生的慢性皮炎/湿疹症状。

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(责任编辑：尹晨茹)

Investigation of the Treatment and Mechanism of Total Physailins of Physalis minima on Atopic Dermatitis

Zhou Sonlin1,2,Zhao Huangge1,Lin Yinying1,Huang Yonghao1

(1.Hainan Provincial Key Laboratory of Tropical Medicine,Hainan Medical College,Haikou 571199,China; 2.College of Life Sciences, Nanjing Normal University, Nanjing 210046,China)

Objective:To explore the effects total physailins of Physalis minima(TPPM), a traditional Chinese folk medicine, on chronic dermatitis in mice induced by 2,4-dinitrochlorobenzene (DNCB).Methods:Therty-six mice were randomly divided into six group. Twenty-five microliters of 0.1% DNCB in acetone/olive oil (3∶1) was applied to each side of right ears and dorsal skin three times with 7d intervals in 5 weeks. Mice in different groups were applied prednisolone and TPPM respectively after each challenge. Weight difference of two ears, pathological change of right ear and dermal inflammatory cell number, and examine the content of total serum Ig E and IL-2 levels were used to assess the effects of the drugs.Results:after the 5 weeks challenge, weight differences of two ears in the TPPM group and prednisolone group were significantly decreased as compared with that in the others, and also led to the remarkable suppression of the development of dermatitis, as determined by a histological examination and the serum Ig E levels, and rose the serum IL-2 level.Conclusion:TPPM has an obvious effect in treatment of chronic dermatitis in mice.

Atopic Dermatitis;Total Physailins of Physalis minima

2014-12-22

海南省自然科学基金(808157)；海南大型仪器共享补贴基金(120313)

周松林(1979-)，男，海南医学院热带病重点实验室助理研究员，研究方向为天然药物。

R285.5;R246.7

A

1673-2197(2015)10-0010-03

10.11954/ytctyy.201510005