马翠花，种靖慧，廖金凤，林永敏，卫佳，郑国光(中国医学科学院血液学研究所血液病医院，天津300020;2秦皇岛市第一医院)

mM-CSF及其剪切体对淋巴细胞白血病Ramos细胞增殖的抑制作用

马翠花1，2，种靖慧1，廖金凤1，林永敏1，卫佳1，郑国光1
(1中国医学科学院血液学研究所血液病医院，天津300020;2秦皇岛市第一医院)

摘要:目的探讨膜结合型巨噬细胞集落刺激因子(mM-CSF)及其剪切体(mM-CSF-Δ)对淋巴细胞白血病Ramos细胞增殖的抑制作用。方法采用Overlap PCR法构建带有mM-CSF的真核表达质粒pTARGET-mM-CSF，再进一步构建胞内区截短30个氨基酸的表达质粒pTARGET-mM-CSF-Δ，并进行PCR及DNA双向测序鉴定。将空载体pTARGET、pTARGET-mM-CSF、pTARGET-mM-CSF-Δ质粒分别转染Ramos细胞，经G418筛选稳定表达细胞株，并用RT-PCR、Western blotting进行鉴定; MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期。结果成功构建了mM-CSF和mM-CSF-Δ的真核表达载体，获得了稳定转染细胞株Ramos-V、Ramos-M和Ramos-Δ。Ramos-M、Ramos-Δ、Ramos-V细胞增殖能力的OD值分别为0.413±0.014、0.384±0.019、0.463±0.037，Ramos-M细胞与Ramos-Δ细胞比较，Ramos-M、Ramos-Δ细胞分别与Ramos-V细胞比较，P＜0.05或＜0.01。Ramos-M、Ramos-Δ、Ramos-V细胞处于G0/G1期的比例分别为41.54%±1.22%、45.60%±1.09%、39.20%±1.53%，Ramos-M细胞与Ramos-Δ细胞比较，Ramos-M、Ramos-Δ细胞分别与Ramos-V细胞比较，P＜0.05或＜0.01。结论mM-CSF、mM-CSF-Δ均能抑制淋巴细胞白血病Ramos细胞增殖，且后者抑制作用更强。

关键词:白血病; Ramos细胞;巨噬细胞集落刺激因子;膜结合型巨噬细胞集落刺激因子;剪切体;细胞增殖;细胞周期

细胞因子是传递细胞间通信的重要载体之一，其表达、定位发生改变会引起细胞间信号的异常传递。除了经典的可溶性形式，许多细胞因子如TGF-α、干细胞因子等，还以膜结合形式存在，并与其受体通过并置性作用机制参与邻近细胞之间的细胞通信［1］。巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)经选择性剪接可产生3种异构体，即膜结合型CSF (mM-CSF)、分泌型CSF(sM-CSF)和基质型CSF (PG-M-CSF)［2］。……