刘 健 万基伟 高 婷 李银虹

天津中医药大学第一附属医院针灸研究所(天津300193)

·实验研究·

针刺对自发性高血压大鼠血压和抗氧化酶SOD、GSH-PX的影响*

刘 健△万基伟▲高 婷▲李银虹▲

天津中医药大学第一附属医院针灸研究所(天津300193)

目的：观察针刺对自发性高血压大鼠(SHR)血压的影响，从抗氧化酶角度探讨针刺降压机制。方法：将SHR随机分为针刺组、模型组，以京都Wistar大鼠(WKY)作为血压正常的对照组。针刺组取双侧人迎穴，施以捻转手法，捻转频率为120～160次/min，行针1min，每日针刺1次；模型组和正常组进行与针刺组相同时间、相同程度的捉抓。每天针刺前后测量收缩压和舒张压。针刺20d后，取胸主动脉，用黄嘌呤氧化酶比色法测定SOD活性，化学比色法测定GSH-PX活性。结果：针刺20d后SHR收缩压和舒张压均较针刺前降低，且均低于模型组。针刺组SOD和GSH-PX活性较模型组均有升高的趋势。结论：针刺可降低SHR血压，其机制可能与提高SOD和GSH-PX活性，从而提高机体抗氧化能力有关。

高血压病是全球范围的重大公共卫生问题。各种降压药物发展很快，但常存在不同程度的副作用，且都有各自的适应证和禁忌证。我们前期研究已证实了针刺降压的有效性[1]。氧化应激在高血压的病因学中起重要作用[2]。Harrison对氧化应激与高血压提出了新的概念：认为氧化应激对高血压的发生发展，其相应的靶点是血管损害[3]。本研究观察针刺人迎穴对自发性高血压大鼠(SHR)血压变化的影响，通过对比SHR大鼠胸主动脉抗氧化系统中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性的变化，研究针刺是否可以通过激发大鼠体内抗氧化应激系统从而达到调控血压的目的。

1 材料与方法

1.1 试剂 超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(购自南京建成生物工程研究所)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)测试盒(购自南京建成生物工程研究所)、BCA蛋白定量测试盒(购自武汉博士德生物公司)、冰乙酸、生理盐水等。

1.2 仪器 智能无创鼠尾动脉血压测量仪(日本软隆BP-98A)、紫外分光光度计(日本岛津UV2501)。

1.3 实验动物及分组 雄性自发性高血压大鼠(SHR)20只，京都Wistar大鼠(WKY)10只，16周龄，体重190-240g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。适应性喂养1周后，将20只SHR大鼠(收缩压≥180mmHg)采用Excel工作表自动生成的随机数字表随机分为针刺组和模型组，每组10只。将10只WKY大鼠作为血压正常的正常组。

1.4 穴位选取及针刺方法 选取“人迎”为针刺穴位。根据人和大鼠解剖特点和人迎穴定位特点，以中国针灸学会实验针灸研究会制订的“动物针灸穴位图谱”作为参考，确定大鼠人迎穴定位：颈部三角区内，当胸骨舌骨肌与胸锁乳突肌上缘交点，约当颈总动脉分叉处，体表可触及搏动，当直刺时可见针柄随动脉搏动而上下振动。固定大鼠，暴露双侧颈部人迎穴部位，选用华佗牌0.3mm×40mm毫针直刺人迎穴，深度2～3mm，见针柄随动脉搏动而上下振动，为刺中穴位。施以捻转手法，捻转频率为120～160次/min，行针1min，以节拍器辅助，便于掌握捻转的频率和时间。针刺组每天上午针刺1次，每周针刺5d，休息2d，共治疗4周。模型组和正常组均不针刺，与人迎组在同一时间进行相同抓取刺激。

1.5 血压的测量 于每天针刺前，针刺后1h，用动物智能无创血压测试仪测量各组大鼠的尾动脉收缩压和舒张压。具体使用方法：①测压前确保动物室环境安静、温度适宜，打开血压仪器系统预热，压力值设为220mmHg；②打开鼠袋，将鼠网放入保温筒，再将保温筒放入鼠袋，确保合适；③抓取大鼠，动作轻柔的将待测大鼠置于鼠袋内，固定鼠袋，使尾巴暴露在外，将大鼠尾部穿过加压感应器，使加压感应器距尾根3～5cm处；④打开软件，待大鼠安静，尾动脉血管充分预热扩张，界面显示动态血压波形稳定后开始测量血压，连续测量2次，取平均值。前后两次血压值波动幅度不超过10%为度。

1.6 取材和指标检测 各组大鼠于治疗20次结束后，用10%水合氯醛按0.35mL/100g体重的剂量麻醉大鼠，迅速开胸取胸主动脉，清除周围的结缔组织，放入冻存管中-80℃保存。检测时取出组织，匀浆，按照试剂盒说明书，用黄嘌呤氧化酶比色法测定SOD活性，化学比色发测定GSH-PX活性。

2 结 果

2.1 各组大鼠针刺治疗4周后血压变化 ①针刺前，针刺组和模型组之间收缩压、舒张压均无差异(P>0.05)，说明针刺前血压基线一致，具有可比性。②4周后，模型组收缩压和舒张压均升高，虽无统计学差异(P>0.05)，但仍可提示SHR收缩压和舒张压有随周龄增长而升高的趋势。③针刺4周后，针刺组收缩压和舒张压均较针刺前降低(P<0.05)，且均低于模型组(P<0.05)，提示针刺具有降低SHR收缩压和舒张压的作用。见表1、表2。

表1 各组针刺前和针刺4周后收缩压比较

注：△与正常组比较，P<0.05；与同组针刺前比较，◇P<0.05；▲与针刺后模型组比较，P<0.05。

表2 各组针刺前和针刺4周后舒张压比较

注：△与正常组比较，P<0.05；与同组针刺前比较，◇P<0.05；▲与针刺后模型组比较，P<0.05。

2.2各组大鼠SOD、GSH-PX活性的变化 SHR胸主动脉中SOD活性较正常组低(P<0.05)，虽然针刺可以使其升高，但尚未显示出统计学意义(P>0.05)。分析其原因，可能与样本量少有关(n=6)。因此我们推测若扩大样本量检测，有可能得出针刺可提高SHR体内SOD活性的结论。同样，由于样本量较少(n=6)，针刺组和模型组的GSH-PX活性有低于正常组的趋势，但差异无统计学意义(P>0.05)。针刺可以使其升高，但尚未显示出统计学意义(P>0.05)。若扩大样本量检测，有可能得出针刺可提高SHR体内GSH-PX活性的结论。见表3。

表3 各组大鼠针刺4周后胸主动脉SOD、GSH-PX活性

注：△与正常对照组比较，P<0.05。

3 讨 论 人迎穴是治疗高血压的有效穴位。其位于胸锁乳突肌的前缘颈总动脉搏动处，深面紧邻颈动脉窦，内有压力感受器。当其受刺激，反射性引起迷走神经兴奋性增高，而交感神经紧张度降低，导致颈部周围大多数血管平滑肌松弛，外周阻力减小，从而达到改善动脉血流的目的。现代医学证实，针刺颈动脉窦能迅速产生显著的双向调节血压的作用[4]。国外相关研究也证实人迎穴是治疗高血压病确有疗效的穴位。在美国有一项采用非药物疗法治疗难治性高血压的小规模Ⅱ期临床试验。试验以脉冲形式刺激毗邻两侧颈动脉窦的人迎穴部位，结果显示，此方法降压效果显著、有助于改善心脏的结构和功能，许多患者在血压控制后生活质量明显提高[5]。

本研究发现，SHR的收缩压和舒张压有随周龄变化而不断升高的趋势，通过20次针刺，可降低血压，肯定了针刺降压的疗效。氧化应激是高血压发病的重要机制之一。与高血压相关的抗氧化酶主要有SOD和GSH-PX等，它们与各种抗氧化物协同清除活性氧族(ROS)、自由基，保持细胞氧化还原的动态平衡、控制细胞信号以及防止潜在的破坏性行动，减轻靶器官氧化损伤，从而抑制氧化应激作用，在机体的抗氧化系统中起着重要作用。大量临床和实验表明，针灸可以不同程度提高心肌缺血、冠心病、高血压和中风患者体内的SOD、GSH-PX活性，抑制内皮素大量分泌，促进NO释放，增强机体对抗氧自由基的能力[6-7]。本研究发现SHR体内的抗氧化酶SOD和GSH-PX活性较WKY相对较低，针刺后，其活性升高(虽然不具有统计学意义，但仍可看出升高的趋势)，说明针刺人迎穴具有一定的提高机体抗氧化能力的作用，这也是针刺降压的作用机制之一，为临床针刺降压提供了科学依据。本研究因条件所限，检测指标样本量较少，以后可以扩大样本量本研究，以期为针刺降压提供更扎实的实验依据。

[1] 殷 春，杜宇征.针刺人迎穴为主对原发性高血压降压效应观察[J].中国针灸,2012,32(9)：776-778.

[2] 松井宏光.氧化应激与高血压[J].日本医学介绍,2006,27(12)：552-553.

[3] Wang D,Strandgaard S,Iversen J,et al.Asymmetric dimethylarginine,oxidative stress,and vascular nitric oxide synthase in essential hypertension[J].Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol,2009,296(2)：195-200

[4] 张秀桐.针灸针麻研究[M].北京：科学出版社,1986：611-614.

[5] 石学敏,申鹏飞.从针刺人迎穴降压谈针灸学的原始创新[J].上海针灸杂志,2010,29(2)：67 -68

[6] 刘丽英,石光霞,刘存志.针灸抗氧化作用的研究概况[J].2011，52(22)：1969-1972.

[7] 卫 彦,寇吉友,陈 军.针刺人迎穴对高血压患者血清中血管活性物质影响的研究[J].针灸临床杂志,2010，(2)：16-18.

(收稿2015-03-16；修回2015-04-20)

The effects of acupuncturing on spontaneously hypertensive rats blood pressure and antioxidant enzymes SOD&GSH-PX

Acupuncture Institute,First Teaching Hospital of Tianjin University of TCM(Tianjin300193)

Liu Jian Wan Jiwei Gao Ting et al

Objective：To observe the effects of acupuncture on SHR blood pressure,and research the mechanisms from the perspective of antioxidant enzymes.Method：To separate the SHRs into acupuncture group and model group randomly,WKYs as normal blood pressure controlled group.To acupuncture group,acupuncture with the twirling manipulation,frequency120-160/min,lasting 1min.Model group and normal group were treated by the same crawl stimulation.The systolic pressure was measured before and after the treatment every day.After 20 days of treatment,all the rats were decapitated and got the thoracic aorta.The activity of SOD and GSH-7PX was measured by xanthine oxidase colorimetric method and chemical colorimetry.Results：After 20 days acupuncture,in acupuncture group,the both systolic and diastolic blood pressure of SHR were lower than before,and lower than model.The activity of SOD and GSH-PX in acupuncture were rising trend compared with model group.Conclusion：Acupuncture can reduce SHR systolic and diastolic blood pressure and its mechanisms may be related to improve the activity of SOD and GSH-PX,thus enhance the antioxidant capacity.

Hypertension/acupuncture therapy Animal,experiment Rats

*国家自然科学基金项目(81202738)；教育部“长江学者和创新团队发展计划”创新团队资助；天津市应用基础与前沿技术研究计划(13JCZDJC31700)；天津市卫生局中医中西医结合科研项目(11036)

△国家中医药管理局脑病针刺疗法重点研究室；国家中医药管理局针刺量效关系三级实验室；天津市针灸学重点实验室(天津300193)

▲天津中医药大学(天津 300193)

高血压/针刺疗法 动物，实验 大鼠

R544.1

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.10.088