寇学良 臧巧真 龙凯花 王春柳□ 李晓尧 苏 瑞

陕西省商洛市中心医院(商洛 726000)

心压平胶囊中丹酚酸B含量测定的方法学研究

寇学良 臧巧真△龙凯花▲王春柳▲□李晓尧△苏 瑞△

陕西省商洛市中心医院(商洛 726000)

目的：建立心压平胶囊中丹酚酸B( C36H30O16)含量测定的方法。方法：采用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈-1.0%甲酸水(20∶80)为流动相，检测波长为286 nm，柱温25℃，流速1.0 mL/min。结果：丹酚酸B在进样量为113.40 μg/mL～680.40 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999)，平均回收率为102.86%，RSD为0.95%(n=6)。结论：该方法操作简单、准确、重复性好，为控制心压平胶囊中丹酚酸B的含量提供了依据。

心压平胶囊是由钩藤、丹参、夏枯草、猪胆膏等十味中药组成的复方中药制剂。具有泻火养阴，平肝熄风，舒脉通络之功效，主要用于高血压病I、II级，肝阳上亢，阴血不足等症候。丹参中的酚酸类化合物是心压平胶囊发挥药效的物质基础，而丹酚酸B则是丹酚酸中含量最多、生物活性最强的化合物[1-2]。故本文以丹酚酸B作为检测指标对心压平胶囊处方中的丹参进行质量控制，为保证临床疗效稳定发挥奠定基础。

1 仪器与材料 1.1 仪器 美国安捷伦1260系列高效液相色谱仪，四元梯度泵，二极管阵列检测器(DAD)，自动进样器，OpenLAB CDS ChemStation工作站。U-2910紫外可见分光光度计，Sartorius BP211D分析天平，Sartorius BP61分析天平，KH-300DE超声清洗器等。

1.2 材料 丹酚酸B对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111562-201514)；心压平胶囊(批号：140501、140502、140503)由陕西步长制药有限公司提供；阴性样品由陕西省中医药研究院自制。水为超纯水，甲醇、乙腈为色谱纯(美国Fisher)。其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果 2.1 色谱条件与系统适用性 Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-1.0%甲酸水(20∶80)；流速：1.0 mL/min；检测波长：286 nm；柱温25℃；进样量10 μL。理论塔板数以丹酚酸B峰面积计算应不低于2000。

2.2 对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成每1mL含0.57 mg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取本品胶囊内容物约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加75%甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30min，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 专属性考察 按心压平胶囊处方比例及制备工艺制成不含丹参药材的阴性对照，按2.1项下色谱条件测定。结果显示阴性对照无干扰，见图1。

(1、2对照品；3、4阴性对照；5、6心压平胶囊)

图1 丹酚酸B对照品、心压平胶囊、阴性对照重叠HPLC色谱图

2.5 线性关系考察 丹酚酸B对照品溶液(0.567 mg/mL)分别进样2 μL、4 μL、6 μL、8 μL、10 μL、12 μL，按2.1项下色谱条件测定峰面积，以丹酚酸B进样量(μL)与峰面积(Y)绘制标准曲线，并计算回归方程：Y=349.37X+325.30，r=0.9999(n=6)。结果表明，丹酚酸B进样量在113.40 μg/mL～680.40 μg/mL范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验 取对照品溶液重复进样6次，按2.1项下色谱条件测定，记录其峰面积值。结果对照品溶液的RSD为0.08%(n=6)，表明方法精密度良好。

2.7 重复性试验 取同一批号供试品(批号：140503)0.5 g，平行6份，按2.3项下方法制备成样品溶液，按2.1项下色谱条件测定，计算丹酚酸B含量。结果平均含量为10.16 mg/g，RSD为0.41%，表明方法重复性良好。

2.8 稳定性试验 取同一心压平胶囊样品溶液(批号：140503)分别于放置0、2、4、6、8、12、24 h时测定。结果RSD为0.28%(n=6)，表明方法稳定性良好。

2.9 加样回收试验 取已知含量样品约0.25 g(批号：140503；含量10.16 mg/g)，平行6份，分别精密加入已知浓度的丹酚酸B对照品溶液，按2.1项下色谱条件测定，计算其含量，并计算回收率。结果平均回收率为102.86%，RSD为0.95%，表明方法准确度良好。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=6)

2.10 样品含量测定 取3批心压平胶囊样品，按2.3项下方法制备样品溶液，按2.1项下色谱条件测定，并计算其结果。结果见表2。

表2 3批样品含量测定结果(n=3)

3 讨 论 流动相的选择:参考《中国药典》2010年版一部丹参项下丹酚酸B含量测定色谱条件甲醇-乙腈-甲酸-水[3-4](30∶10∶1:59)、甲醇-乙腈-1.0%甲酸(25∶10∶65)、乙腈-1.0%甲酸(20:80)，结果三种流动相的供试品色谱图中丹酚酸B均可达到基线分离，其中流动相乙腈-1.0%甲酸(20∶80)预测定峰型较好，流动相配制简捷，阴性无干扰，故确定流动相为乙腈-1.0%甲酸(20∶80)。提取方法的选择:考察了常用的超声提取与加热回流提取方法。结果超声提取较回流提取丹酚酸B含量高，且超声提取快捷方便，故确定超声为提取方法。溶剂的选择：分别考察以甲醇、75%乙醇、75%甲醇为提取溶剂时的峰面积，75%甲醇平均峰面积/称样量大于甲醇、75%乙醇，故确定75%甲醇为提取溶剂。超声时间的考察：分别考察超声20 min、30 min、40 min时的平均峰面积/称样量，超声30 min丹酚酸B含量测定结果较高且节省时间，故确定超声时间为30 min。

[1] 丰成相.丹参的化学成分及药理作用概况[J].中国民族民间医药，2012，2：25-26.

[2] 林 超，刘兆国，钱 星，等．丹酚酸B在心血管疾病中药理作用研究进展[J]．中国药理学通报，2015，31(4)：449-452．

[3] 杨亚丽，樊宝娟.HPLC法测定消栓通络胶囊中丹酚酸B的含量测定[J].陕西中医，2011，32(10)：1402-1404.

[4] 国家药典委员会.中国药典: 第一部[S ] .北京: 中国医药科技出版社，2015: 70-71.

(收稿2015-04-20；修回2015-05-18)

△陕西中医药大学(咸阳 712046)

▲陕西省中医药研究院(西安 710003)

□通讯作者

色谱法，高压液相 @丹酚酸B @心压平胶囊

R282

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.10.087