张锦捷， 曾庆祝

(广州大学 化学化工学院， 广州 510006)

壳聚糖-Zn(II)亲和层析介质的制备及表征

张锦捷， 曾庆祝

(广州大学 化学化工学院， 广州 510006)

以自制的壳聚糖微球为载体，环氧氯丙烷(ECH)为活化剂，亚氨基二乙酸(IDA)为螯合配基，Zn2+为螯合金属离子制备壳聚糖-Zn(II)亲和层析介质。最佳活化工艺：M壳聚糖(g)∶VECH(mL)为1∶4、NaOH浓度为1.2 mol/L、活化温度为50℃，活化时间为4 h，测得环氧基修饰密度达0.2472 mmol/g；最佳螯合工艺：IDA作为配基、浓度为0.6 mol/L、反应温度为70℃、反应时间为6 h，ZnCl2作为螯合金属盐、浓度为0.1 mol/L、反应时间为3 h，Zn2+螯合量达到最大值。通过红外光谱表征，证明壳聚糖与Zn(II)发生了螯合配位反应，生成了壳聚糖-Zn(II)配合物。

壳聚糖；Zn(II)；壳聚糖-Zn(II)；固定化金属螯合亲和层析(IMAC)

固定化金属螯合亲和层析(Immobilized Metal Ion Affinity Chromatography, IMAC )是由Porath等[1]于1975年首次提出，利用蛋白质表面暴露的一些氨基酸残基与载体上的金属离子在不同条件下配位键的形成和解离，达到分离纯化效果的技术。某些蛋白质或氨基酸对一些过渡态金属离子如Cu2+、Zn2+和Ni2+等具有包括范德华力、静电作用、共价键等特异亲和力；当这些亲和力强于H2O分子或带负电的阴离子时，蛋白质就会与这些金属离子结合成复合物[2-3]。不同蛋白质对金属离子的亲和能力不同，其关键在于组氨酸、色氨酸和半胱氨酸这一类电子供体氨基酸能与金属离子形成配位复合物[4]。在层析介质上固定不同的金属离子制成金属螯合亲和吸附剂，可选择性地吸附表面裸露有巯基或咪唑基等基团的多肽蛋白，用于层析纯化蛋白质。由于配基简单、吸附量大、交换载量大、分离条件温和及通用性强等特点，IMAC被广泛应用于蛋白质等生物工程产品的分离纯化，逐渐成为最有效的技术之一[5-6]。……