钟雪梅，陈 敏△，邓世山，谢少利

（川北医学院：1.附属医院内分泌科；2.解剖教研究；3.附属医院乳腺外科，四川南充637000）

甲状腺癌是内分泌系统常见恶性肿瘤，近年来甲状腺癌的发病率逐年增高，2010年男性和女性发病率分别为4/10万和12/10万，是第8个最常见肿瘤，第5位女性最常见肿瘤［1－3］。他的病理分型有甲状腺乳头状癌（papillary thyoid carcinoma，PTC）、髓样癌、滤泡型癌和未分化癌，而PTC是最常见的一型。由于甲状腺结节构成复杂、淋巴结转移早、具有多灶性及发病率较年轻等特点，所以甲状腺结节的良恶性很难鉴别，需要更敏感可靠的肿瘤标记物用于早期诊断的研究。甲状腺癌发病机制方面的研究，在基因和转录水平上的研究报道较多。Annexin家族是钙依赖性的磷脂结合蛋白，他广泛存在于细胞内，约占细胞总蛋白的0.2%～5.0%，Annexin A1是其中第一个被发现的成员［4－5］。目前，已有 Annexin A2与甲状腺癌和PTC之间关系研究的报道，但Annexin A1在人体PTC组织中表达的研究，国内外报道极少，因此，本实验通过观察Annexin A1在PTC组织和癌旁正常组织的表达情况，探讨其与PTC的关系，为进一步的功能研究提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集川北医学院附属医院2010年1月至2013年1月的PTC组织病理标本。病例纳入标准：所有患者临床病例资料完整，经病理确诊的PTC标本69例，术前均未接受任何抗肿瘤治疗和放射性碘治疗，在此基础上选择同一患者癌旁组织的标本69例（距癌组织大于1cm）。排除标准：甲状腺良性病变、结节性甲状腺肿、桥本甲状腺炎等。纳入的69例患者中，男14例，女55例，年龄14～81岁，中位年龄40岁。其中，＜45岁38例，占55.07%；≥45岁31例，占44.92%；TNM分期中的T分期：T138例，T224例，T36例 ，T41例。69例PTC组织中有淋巴结转移27例，占39.13%。

1.2 方法 根据HE切片选取具有代表性的部位，找到存档组织蜡块及冰冻组织，包括癌组织、癌旁正常组织和淋巴结转移灶，选取对应蜡块，进行切片，厚度为4μm，烘干，备用。免疫组织化学：免疫组织化学采用二步法。Ⅰ抗为小鼠抗人Annexin A1单克隆抗体（美国ORIGENE公司），Ⅱ抗免疫组织化学试剂盒购自北京中杉金桥公司。按试剂盒说明书方法进行，组织经过脱蜡、水化后用枸橼酸对组织进行抗原修复。3%的过氧化氢阻断内源性过氧化物酶活性，加Ⅰ抗Annexin A1单克隆抗体50μL，浓度为（1∶50），4℃ 冰箱过夜。PBS洗涤后，加聚合物增强剂，37℃孵育30min；加Ⅱ抗（山羊抗小鼠），37℃ 孵育30min。加新配制的DAB溶液5min，水洗，苏木素复染，梯度乙醇脱水干燥，中性树胶封片。

1.3 免疫组织化学结果判断标准 染色结果判定采用二级计分法［5］。染色强度分级计分标准：无显色为0分；淡黄色为1分；黄或深黄色为2分；褐或棕褐色为3分。阳性细胞计分标准：≤5%为0分；＞5%～25%为1分；＞25%～50%为2分；＞50%～75%为3分；＞75%为4分。两者计分的乘积作为判断标准：0分为阴性（－）；1～4分为弱阳性（＋）；5～8分为阳性（＋＋）；9～12分为强阳性（＋＋＋）。将－和＋定为阴性，＋＋和＋＋＋定为阳性。

1.4 统计学处理 采用SPSS15.0统计软件进行统计学分析。计数资料以率表示，采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 癌组织和癌旁正常组织中Annexin A1表达情况 69例PTC中，Annexin A1蛋白表达阳性率（88.41%，61/69）高于癌旁正常组织（8.69%，5/69），差异有统计学意义（P＜0.01）。Annexin A1蛋白主要定位于细胞质，呈毛玻璃状、弥散状分布，着色深浅不一，细胞核及膜中有少量表达，见图1。

图1 Annexin A1阳性表达情况（DAB显色×200）

2.2 Annexin A1蛋白表达与PTC临床病理特征间的关系PTC组织中Annexin A1阳性表达与性别、年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。淋巴结转移患者Annexin A1阳性表达高于无淋巴结转移患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。肿瘤大于或等于1cm的患者AnnexinA1在PTC中的阳性表达率高于肿瘤小于1cm的患者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 69例Annexin A1蛋白表达与PTC临床病理特征间的关系（n）

2.3 Annexin A1在69例癌组织TMN分期中的阳性表达情况 TNM分期中由于PTC分期较细，故将TNM分期大致分为2个范围，且在临床分期中，45岁以下都是Ⅰ期。因此，TNM分期的影响并不显著，总体趋势显示出分期越晚，PTC癌组织中Annexin A1阳性表达率越高，T1N0M0～T2N1M0期阴性6例，阳性56例，T3N0M0～T4N1M0期阴性2例，阳性5例，差异无统计学意义（χ2＝0.735，P＝0.391）。

3 讨 论

PTC的发病机制不仅与甲状腺自身免疫性病变、碘摄取异常、电离辐射等有关，更与一系列遗传和BRAF基因点突变等有关［6－7］，这就需要基因水平的分子诊断和靶向治疗。Annexin A家族在脊柱细胞动物中有13个成员，即Annexin A1～A13［8］，已有研究显示 Annexin A2在甲状腺癌中表达上调［9］。Annexin A1与肿瘤的发生发展也有着密切联系，在一些肿瘤中Annexin A1表达显著降低甚至缺失。Wang等［10］发现在正常乳腺组织和乳腺良性病变组织中，Annexin A1在上皮细胞中呈现出强阳性表达。认为其表达程度与乳腺癌的进展呈反比关系。在口腔鳞状细胞癌、前列腺癌表达也显著降低［11－13］。但在另外一些肿瘤细胞中表达却有所增加，如结直肠癌、胰腺癌［14－15］。燕贞等［16］发现 Annexin A1在肺鳞癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织。

研究表明，甲状腺癌的发生是多基因、多蛋白参与的结果［17］。本研究应用免疫组织化学法检测了 Annexin A1在PTC的原发灶、转移灶及癌旁正常组织的表达，为探讨PTC组织中Annexin A1蛋白表达与临床病理特征之间的关系，本研究将性别、年龄、有无淋巴结转移、肿瘤直径等因素纳入进行分析，发现Annexin A1蛋白表达与淋巴结转移及肿瘤大小相关，这也与文献报道Annexin A2在PTC中的高表达相似［9］。但Annexin A1在PTC中的表达与患者的性别、年龄无相关性，TNM分期的影响并不显著，总体趋势显示出分期越晚，PTC组织中Annexin A1阳性表达率越高，差异无统计学意义（P＝0.391），这可能与本研究样本量少、地域等因素有关。Annexin A1在PTC中的高表达为肿瘤的早期诊断提供新的标志物的可能性。Annexin A1在PTC的发生、发展及转移的分子机制的进一步研究将对人PTC的诊治及预后起到重要作用。

由于受研究人群的地域、环境、样本量较少等的影响，对于Annexin A1在PTC的进展作用需进一步研究证实，相信随着Annexin A1基础研究的深入，以Annexin A1为靶点的治疗可为PTC的治疗提供更多的新思路。

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