陈丽君等

[摘要] 目的 探讨汉黄芩素对人卵巢癌HO-8910细胞增殖、凋亡的影响，并分析可能的作用机制。 方法 采用不同浓度（0、20、50、80、100、130 μg/mL）的汉黄芩素处理人卵巢癌HO-8910细胞，48 h后分别用MTT法检测细胞活力的变化，Annexin Ⅴ/PI双染法检测细胞凋亡的变化，Western blotting分析p21、cyclin B1、p53和Bax蛋白的表达水平。 结果 随着处理浓度的增加，汉黄芩素剂量依赖性地抑制人卵巢癌HO-8910细胞的增殖（P < 0.05），同时诱导细胞大量凋亡。进一步分析证实，汉黄芩素能够剂量依赖性地下调细胞周期相关蛋白cyclin B1的表达，同时上调p21的表达（P < 0.05），提示汉黄芩素可通过抑制细胞有丝分裂进程来抑制细胞的增殖。此外，汉黄芩素还能显著诱导p53通路的活化及其下游促凋亡分子Bax的表达（P < 0.05）；而用p53通路抑制剂PFT-α预处理能够显著性降低汉黄芩素诱导的促卵巢癌细胞的凋亡效应（P < 0.05）。 结论 汉黄芩素能通过抑制细胞有丝分裂进程及调控p53促凋亡通路的活化来抑制卵巢癌细胞的增殖，同时显著诱导细胞大量凋亡，提示汉黄芩素可能具有一定的抗卵巢癌活性，从而为进一步探讨其作为临床治疗卵巢癌的潜在药物奠定理论基础。

[关键词] 卵巢癌；汉黄芩素；增殖；凋亡；细胞周期

[中图分类号] R737.31 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2015）02（b）-0004-05

[Abstract] Objective To explore the role and underlying molecular mechanism of wogonin on the proliferation and apoptosis of ovarian carcinoma HO-8910 cells. Methods Following the stimulation with various doses of wogonin （0， 20， 50， 80， 100， 130 μg/mL） for 48 h， MTT colorimetry was used to detect cell proliferation rate. Cell apoptosis was analyzed using double staining with Annexin Ⅴ and propidium iodide （Annexin Ⅴ/PI）. The expression levels of p21， cyclin B1， p53 and Bax were assessed by Western blotting. Results Wogonin dampened ovarian carcinoma HO-8910 cell proliferation and promoted the apoptosis rates in a dose-dependent manner （P < 0.05）. Moreover， wogonin dose-dependently down-regulated the expression levels of cell cycle protein cyclin B1， as well as the up-regulation of p21 expression levels （P < 0.05）， suggesting that wogonin might inhibit cell growth by suppressing cell cycle. Additionally， an obvious increase in p53 and its downstream Bax was observed in HO-8910 cell stimulated with wogonin statistically （P < 0.05）. However， this up-regulation was dramatically attenuated when preconditioning with p53 inhibitor PFT-α （P < 0.05）. Conclusion Wogonin can abrogate HO-8910 cell proliferation and enhance cell apoptosis by regulating cell mitosis and apoptosis-related p53 pathway， implying as potential suppressor for ovarian cancer. Therefore， this study will support its potential targets for further development of anti-ovarian cancer therapy.

[Key words] Ovarian cancer； Leptin； Proliferation； Apoptosis； Cell cycle

汉黄芩素（wogonin，别名5，7-二羟基-8-甲氧基-2-苯基-4H-1-苯并呋喃-4-酮）是从中药黄芩根及半枝莲中提取的活性物质，具有抗病毒、抗菌、保护血管、降血脂及利胆、解痉等生物活性[1-4]。近年来，汉黄芩素在抗肿瘤中的作用得到广泛关注。研究表明，汉黄芩素能够有效地抑制多种癌细胞的生长，同时诱导肿瘤细胞的大量凋亡[4-5]。但是，汉黄芩素对卵巢癌细胞的影响及其机制尚不清楚。因此，本研究体外观察汉黄芩素对卵巢癌细胞HO-891增殖及凋亡的影响，并探讨相关的作用机制，从而为进一步探讨其在临床中的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

人卵巢癌HO-8910细胞株购自南京凯基生物科技发展有限公司；胎牛血清和MTT购自华美生物工程有限公司；p53抑制剂PFT-α购自Calbiochem公司；Annexin Ⅴ/PI双染凋亡检测试剂盒购自BD公司；兔抗人p53、p21和Bax多克隆抗体均购自美国Santa Cruz公司；兔抗人cyclin B1抗体和小鼠抗兔-HRP标记抗体均购自Cell Signaling公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养与处理 将人卵巢癌HO-8910细胞株置于含10%灭活胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 g/mL链霉素的RPMI1640培养基中，37℃、5%CO2孵箱中培养。……