王晓青，贾燕花，高 磊，马 静，刘皈阳



氯霉素羊毛脂软膏中氯霉素含量和有关物质测定方法的改进

王晓青，贾燕花，高 磊，马 静，刘皈阳*

目的 建立HPLC方法测定氯霉素的羊毛脂软膏中氯霉素的含量和有关物质。方法采用高效液相色谱法，色谱柱：安捷伦C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相：0.01 mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液-甲醇(68∶32)，检测波长：277 nm，进样量：20 μL。结果氯霉素在49.96～199.84 μg/mL的浓度范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系，精密度、稳定性和重复性试验结果良好，平均回收率为99.12%，RSD为0.51%(n=9)，氯霉素与其他杂质的分离度良好。结论该方法具有良好地准确度、精密度、专属性，能良好的控制氯霉素羊毛脂软膏的质量。

氯霉素羊毛脂软膏；HPLC；含量测定

0 引言

氯霉素羊毛脂软膏由氯霉素、羊毛脂、甘油和凡士林组成，临床上主要用于放射治疗引起的皮肤创面感染、湿疹、皮炎等。文献中氯霉素含量测定方法采用紫外分光光度法和高效液相色谱法[1-2]。《中国药典》2010年版采用HPLC法测定氯霉素原料的含量和有关物质[3]。本研究采用HPLC法测定氯霉素羊毛脂软膏中氯霉素的含量以及有关物质，以提供质量可控的药品[4-8]。

1 仪器和试药

岛津LC-20AD高效液相色谱仪；岛津UV-2450紫外分光光度仪；METTLER AL104电子分析天平。氯霉素对照品(批号：130555-201203)、氯霉素二醇物对照品(批号：130436-200704)和对硝基苯甲醛对照品(批号：130562-200902)均购自于中国食品药品检定研究院。氯霉素羊毛脂软膏由解放军总医院第一附属医院生产(批号：20130805、20130806-1、20130806-2)。甲醇为色谱纯(Fisher)，庚烷磺酸钠、三乙胺、磷酸二氢钾、磷酸、乙醇均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：安捷伦C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以0.01 mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液(取磷酸二氢钾6.8 g，用0.01 mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至1 000 mL，再加三乙胺5 mL，混匀，用磷酸调剂pH值至2.5)-甲醇(68∶32)为流动相；检测波长277 nm，进样量20 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密量取氯霉素对照品、氯霉素二醇物对照品及对硝基苯甲醛对照品各适量，用50%乙醇溶液稀释制成每1 mL中各含0.1 mg、12.5 μg和1.25 μg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取供试品约100 mg，加乙醇5 mL，微温使基质融化，搅拌，冷却使基质凝固，分取乙醇液于100 mL量瓶中，基质再用50%乙醇同法处理3次，每次10 mL，洗液并入量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即为含量测定供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例制备不含氯霉素的样品，按照“2.2.2”项下方法制成阴性对照样品。

2.3 专属性试验 主成分含量测定的专属性考察取“2.2”项下的对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 μL，依次注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图1。氯霉素二醇物和对硝基苯甲醛对氯霉素的含量测定无干扰；阴性对照对氯霉素含量测定无干扰。

2.4 线性关系考察 精密称取氯霉素对照品24.98 mg，置于25 mL量瓶中，加50%乙醇使溶解并定量稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL中含氯霉素约1 mg的溶液。精密量取该溶液0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、2.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，用50%乙醇稀释至刻度，即得线性关系考察供试液，分别精密量取各溶液20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以氯霉素的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=34 467 x-7 091(r=0.999 9)。结果表明，氯霉素在49.96～199.84 μg/mL的浓度范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

图1 高效液相色谱图

2.5 精密度试验 精密称取氯霉素对照品10.96 mg，置于100 mL容量瓶中，用50%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得精密度试验供试液。按照“2.1”项下的色谱条件，重复进样6次，记录色谱图。计算氯霉素峰面积积分值的RSD值，RSD=0.2%，表明本方法精密度良好。

2.6 稳定性试验 取“2.2.2”项下的供试品溶液，于室温放置，按照“2.1”项的色谱条件，分别于0、3、6、9、12、15 h测定，记录色谱图，计算氯霉素峰面积积分值的RSD值，RSD=0.1%。结果表明，本方法稳定性良好。

2.7 重复性试验 精密称取同一批号供试品适量(130816-2)，按照“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，平行制备6份，按照外标法计算氯霉素含量。计算含量测定结果的RSD值，RSD=1.1%。结果表明，本方法重复性良好。

2.8 准确度试验 精密称取氯霉素对照品适量(16、20、24 mg)，每个浓度各3份，按照处方比例加入相应量的空白基质，加乙醇5 mL，按照“2.2.2”项下的方法制备准确度试验供试品溶液。按“2.1”项下的色谱条件测定，按照外标法计算氯霉素的含量，计算回收率。

表1 回收率试验结果(n=9)

2.9 样品含量及供试品有关物质测定 分别取3批供试品适量，精密称定，按照“2.2”项下的方法分别制备对照品溶液和供试品溶液，按照“2.1”项下的色谱条件进行含量测定，计算氯霉素含量，结果见表2。精密量取供试品适量，约250 mg，按照“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，即得氯霉素羊毛脂软膏有关物质检查供试品溶液；以“2.2.1”项下的对照品溶液作为有关物质检查的对照品溶液。按照“2.1”项下的色谱条件进样测定，记录色谱图，调节检测灵敏度，使氯霉素二醇物对照品峰的峰高约为满量程的50%，采用外标法计算有关物质的含量。结果见表3。

表2 样品含量测定结果(n=2)

表3 样品有关物质测定结果

3 讨论

文献中选择乙醇为溶剂，50%乙醇为稀释剂，根据准确度试验结果，该供试品制备溶剂能使主成分和基质得到良好分离，准确地测定制剂中主成分的含量。同时，本试验分别考察了不同的仪器、色谱柱、流速、流动相比例对测定结果的影响，结果表明，各条件下被测组分能有效分离，该方法耐用性良好。本试验考察了制剂在强酸、强碱、氧化、光照、高温条件下的稳定性，在强碱条件下，氯霉素二醇物的含量显著增加；在高温条件下，氯霉素二醇物的含量显著增加；在强酸、氧化、光照条件下，氯霉素二醇物的含量无明显变化，对样品在运输和储存的过程中，应注意各种因素对样品质量的影响，以提供质量合格的药品。综上所述，改进后的方法具有良好的准确度、精密度、专属性，能良好地控制氯霉素羊毛脂软膏的质量。

[1] 中国人民解放军总后勤部卫生部.中国人民解放军医疗机构制剂规范[S].北京:人民军医出版社,2002:166.

[2] 王晓蕾,吕晓川,白林.氯霉素羊毛脂软膏含量测定方法研究[J].解放军药学学报,2004,2(1):71-72.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京:化学工业出版社,2010:1029-1030.

[4] 郭江红,赵亚萍,孙春艳.HPLC法测定氯霉素注射液的有关物质和含量[J].中国药师,2011,14(10):1477-1479.

[5] 王浩,张霞,秦文涛.高效液相色谱法测定康肤霜中甲硝唑和氯霉素含量[J].中国药业,2011,20(1):27-28.

[6] 郭江红,赵亚萍,姜红,等.RP-HPLC法测定曲安奈德氯霉素溶液的含量及有关物质[J].药物分析杂志,2012,32(2):323-326.

[7] 马静,贾燕花,王晓青,等.高效液相色谱法测定氯霉素泡腾片中氯霉素含量[J].中国医药导报,2014,11(19):93-95.

[8] 刘晓军.HPLC法同时测定复方甲硝唑西咪替丁乳膏中甲硝唑和氯霉素的含量[J].天津药学,2011,23(1):14-16.

Improvement of the method for the determination of content and related substances in chloramphenicol and lanolin ointment

WANG Xiao-qing,JIA Yan-hua,GAO Lei,MA Jing,LIU Gui-yang*

(Department of Pharmacy,The First Affiliated Hospital of PLA General Hospital,Beijing 100048,China)

Objective To establish an HPLC method for the determination of content and related substances in chloramphenicol and lanolin ointment.MethodsThe determination was performed on Agilent C18column (4.6 mm×250 mm,5 μm) with the mobile phase of 0.01 mol/L sodium heptanesulfonate-methanol (68∶32).The detection wavelength was 277 nm and the sample size was 20 μL.ResultsThe linear range of the chloramphenicol was 49.96～199.84 μg/mL with an average recovery of 99.12% (RSD=0.51%,n=9).The test had good results of precision,stability,repeatability and resolution.ConclusionThe method is accurate,precise and specific for the quality control of chloramphenicol and lanolin ointment.

Chloramphenicol and lanolin ointment; HPLC; Determination of content

2014-11-27

解放军总医院第一附属医院药剂药理科，北京 100048

军队“十二五”军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题(13ZJZ17-2)

10.14053/j.cnki.ppcr.201505022

*通信作者