张文亮，饶雪梅，罗兰芳

(海南省农垦那大医院儿科，海南儋州 571700)

·经验交流·

匹多莫德对小儿支原体肺炎Foxp3的影响及临床治疗作用研究

张文亮，饶雪梅，罗兰芳

(海南省农垦那大医院儿科，海南儋州 571700)

目的 观察匹多莫德对肺炎支原体肺炎(MPP)患儿Foxp3基因表达的影响，并探讨其相关的临床意义。方法收集该院儿科2012年11月至2013年12月治疗的MPP患儿78例为研究对象，分为常规治疗组(对照组)和匹多莫德治疗组(观察组)，每组39例，另取该院体检的健康儿童40例作为健康对照组。Foxp3基因表达使用荧光定量PCR检测，调节性 T 细胞(Treg)使用流式细胞仪检测。结果治疗前观察组和对照组Foxp3基因表达和Treg细胞比例差异无统计学意义(P>0.05)，但均显著低于健康对照组(P<0.01)。治疗后观察组和对照组Foxp3基因表达和Treg细胞比例均出现显著升高(P<0.05)，但治疗后观察组升高的幅度显著高于对照组(P<0.05)。对照组的住院时间、抗菌药物使用时间、6个月内病情反复次数分别为(7.74±2.14 )d、(7.74±2.14 )d和(2.04±0.76)次，显著高于观察组的(4.32±1.58)d、(4.46±1.62 )d和(0.82±0.24)次(P<0.05)。观察组和对照组的临床治疗有效率差异无统计学意义(P>0.05)。结论匹多莫德可以显著升高Foxp3表达并提高Treg细胞比例，纠正患儿的免疫平衡紊乱，有助于MPP患儿的恢复并减少其复发，临床使用安全。

肺炎支原体肺炎；Foxp3基因；调节性 T 细胞；匹多莫德

肺炎支原体(MP)是秋冬季常见的一种儿童下呼吸道感染病原体[1]，其引起的肺炎支原体肺炎(MPP)占儿童呼吸道感染性疾病的20%～30%[2]。MP感染不仅损害呼吸道，还可以引发肺外并发症且并发多脏器功能损害，如肝脏、肾脏、心脏等重要脏器损害，因此积极有效的治疗MPP始终是医务工作者研究的热点[3]。免疫功能紊乱在MPP病变中的作用正受到学者们的关注，以此为靶点的治疗也逐渐在临床上开展，并取得了一定的疗效[4]。匹多莫德(pidotimod)是一种人工合成的免疫刺激剂[5]，本研究观察了匹多莫德对MPP患儿Foxp3基因表达的影响，并探讨了其相关的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集本科2012年11月至2013年12月治疗的MPP患儿78例，其中男38例，女40例，MPP诊断参照胡亚美等[6]主编的《诸福棠实用儿科学》(第7版)。排除标准：心、肝、肾等脏器严重病变，并发其他急、慢性感染性疾病，曾使用激素或者其他免疫调节剂者。78例MPP患儿分为常规治疗组(对照组)和匹多莫德治疗组(观察组)，每组39例。对照组男19例，女20例，年龄3～9岁，平均(5.4±2.5)岁；观察组男19例，女20例，年龄3～8岁，平均(5.2±2.1)岁，两组患者在性别、年龄等临床资料方面差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。另取本院体检中心的健康儿童40例作为健康对照组，其中男20例，女20例，年龄4～10岁，平均(5.8±2.7)岁。健康对照组(n=40)和MPP患儿组(n=78)在性别、年龄临床资料方面差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 对照组给予退热、止咳、化痰等常规治疗。静脉滴注阿奇霉素(利君制药股份公司，国药准字H20000377)，10 mg·kg-1·d-1，5 d为1疗程。治疗1～3个疗程。观察组在对照组基础上加用匹多莫德(浙江仙琚制药股份有限公司，国药准字第H20030325)，前2周，400 mg/次，每日2次;后6周，400 mg/次，每日1次，共8周。比较两组的住院时间、抗菌药物使用时间和临床疗效，所有患儿随访6个月，记录病变反复次数。

1.2.2 疗效评价 参照马红秋等[5]的方法，痊愈：临床症状完全消失；显效：临床症状明显缓解；无效：临床症状无明显改善甚至恶化。有效率(%)=(痊愈+显效)/总例数×100%。

1.2.3 Foxp3基因表达的荧光定量PCR检测 取健康对照、MPP患儿治疗前和治疗后静脉血1 mL，使用RNA提取和反转录试剂盒(美国基因公司产品)，反转录出cDNA第一链。荧光定量检测试剂盒(大连宝生物公司产品)检测Foxp3基因的表达。Foxp3基因：上游引物5′-CGG TTA AGT ACT GTG GAA TTG-3′，下游引物5′-CCT TAA GTA CCA TGG TTG TGC-3′；反应条件为94 ℃ 60 s；94 ℃ 30 s，61 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s，30个循环。△Ct值=目的基因Ct值-内参基因Ct值，Foxp3基因的表达量采用2-△Ct评估。

1.2.4 调节性 T 细胞(Treg)的流式细胞仪检测 取健康对照、MPP患儿治疗前和治疗后静脉血5 mL，裂解红细胞，PBS缓冲液洗涤2次，最后0.4 mL PBS缓冲液悬浮细胞，加入FITC-CD4和APC-CD25(购自美国Millipore公司)抗体各10 μL，避光染色30 min，美国B-D 公司FACS Calibur流式细胞仪检测FITC-CD4和APC-CD25双阳性的Treg细胞。

1.3 统计学处理 采用SPSS12.0统计软件处理数据，两样本均数比较采用t检验，计数资料采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 匹多莫德对MPP患儿Foxp3和Treg细胞的影响 治疗前观察组和对照组Foxp3基因表达和Treg细胞比例差异无统计学意义(P>0.05)，但均显著低于健康对照组(P<0.01)。治疗后两组Foxp3基因表达和Treg细胞比例均出现显著升高(P<0.05)，但治疗后观察组升高的幅度显著高于对照组(P<0.05)。见图1、表1。

图1 Treg细胞的流式细胞仪检测

2.2 匹多莫德对MPP患儿临床指标的影响 对照组的住院时间、抗菌药物使用时间、6个月内病情反复次数分别为(7.74±2.14)d、(7.74±2.14)d和(2.04±0.76)次，显著高于观察组的(4.32±1.58)d、(4.46±1.62)d和(0.82±0.24)次(P<0.05)。

2.3 观察组和治疗组临床疗效和不良反应的分析 两组患儿经积极治疗后均获得痊愈，临床治疗有效率为100%，差异无统计学意义(P>0.05)。用药期间观察组未观察到匹多莫德相关的不良反应发生。

表1 3组Foxp3表达和Treg细胞比例的比较

3 讨 论

MP感染而引起的MPP好发于儿童，该病原菌致病机制复杂[6-7]，除了病原菌毒素的直接侵害外，还与免疫功能紊乱有关，特别是 T 细胞亚群功能紊乱[8]。Treg是新发现的一种CD4+T 细胞亚群成员，对于机体免疫平衡的维持发挥重要的作用，如其主要效应因子IL-10可以抑制致炎因子IL-6、TNF-α等的释放[9]，Foxp3是调控CD4+T细胞向 Treg细胞分化的调控蛋白，是Treg 细胞发育的一个重要开关蛋白[10]，本研究的检测显示MPP患儿中Foxp3表达和Treg比例均显著低于健康对照儿童，说明MPP患儿处于一种Treg 细胞分化抑制状态，失去了对一些治病炎症介质的抑制作用。袁浩等[11]的研究也获得了相似的结果。

MPP发病机制与免疫功能有关已得到广泛认同，目前临床上对MPP的治疗倾向于除了抗支原体治疗外，还应积极促进患儿免疫功能及免疫平衡的恢复[12]。匹多莫德化学结构为3-L-焦谷氨酸四氢噻唑啉羧酸，作为机体免疫增强剂，其可以调节CD4/CD8细胞的比例失调，改善机体的免疫状态。本研究显示使用匹多莫德后MPP患儿Foxp3表达和Treg比例可以得到显著升高，观察组对Foxp3表达和Treg比例的改善作用显著优于对照组。说明加用匹多莫德对MPP患儿T 细胞亚群功能紊乱的纠正起到了积极的作用。临床疗效分析显示两组之间差异无统计学意义(P>0.05)，但观察组的住院时间、抗菌药物使用时间、病情反复次数均显著短于对照组，说明使用匹多莫德后有利于MPP患儿的恢复并且可以有效阻止病情的反复发作。动物实验和临床研究都已经证实匹多莫德的急性及慢性毒性作用都非常低[4]，本研究也没有观察到匹多莫德相关的不良反应，说明匹多莫德是一种安全的治疗方法。

综上所述，本研究显示MPP患儿中Foxp3表达和Treg细胞比例均显著低于健康儿童，匹多莫德可以显著升高Foxp3表达并提高Treg细胞比例，纠正患儿的免疫平衡紊乱，有助于MPP患儿的恢复并减少其复发，临床使用安全，为MPP 提供了一种新的治疗思路。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2015.25.040

张文亮(1978-)，本科，主治医师，主要从事小儿肺炎呼吸系统疾病研究。

R725.6

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1671-8348(2015)25-3572-03

2015-03-08

2015-05-28)