SPIO标记浓度对BMSCs生物学特性的影响及体外MRI表现

2014-12-13赵江民刘佳林雁冰宗根林吴利忠钱海珊游建雄

磁共振成像 2014年2期

关键词：检测

赵江民，刘佳，林雁冰，宗根林，吴利忠，钱海珊，游建雄*

1.上海交通大学医学院附属第三人民医院医学影像科，上海 201999

2.上海市东方医院医学影像科，上海200120

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell，BMSCs)是一类具有高度的自我复制能力和多项分化潜能的细胞[1-3]。近年来，随着分子影像学技术的发展，采用适当的分子标记BMSCs，利用MRI成像技术对其示踪，已成为研究的热点[4-6]。笔者通过对大鼠BMSCs进行不同浓度超顺磁性氧化铁(SPIO)的体外标记，研究其对干细胞的生物学特性的影响，以及不同标记浓度SPIO的MR成像效果，为进一步研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物、主要仪器和试剂

清洁级SD大鼠(上海斯莱克实验动物有限责任公司购入)，4～6周龄5只。

DMEM/F12培养基(美国Gibco公司)，倒置相差显微镜(日本Olympus公司)，MR成像仪(3.0 T，Achieva型)(Phillips公司)，FBS(胎牛血清) (美国Gibco公司)，L-谷氨酰胺、青霉素-链霉素溶液、胰蛋白酶(1:250) (美国Hyclone公司)，超顺磁性氧化铁(商品名Resovist；德国Schering公司)，普鲁士蓝染色试剂盒(上海虹桥乐翔医用试剂公司)。

1.2 大鼠BMSCs的体外分离、培养与传代

SD大鼠行颈椎脱臼法处死，完整取出股骨、胫骨及肱骨，在超净台无菌条件下，用注射器吸取5 ml含15%胎牛血清的完全培养基(DMEM/F12，青霉素100 U/ml，链霉素100 μg/ml)反复冲洗骨髓腔，并用吸管将细胞悬液吹打混匀。将冲出液直接接种于T25的细胞培养瓶内，置于37 ℃、5%CO2、饱和湿度细胞培养箱中培养。

待细胞融合达80%～90% 即可传代。用0.25%的胰蛋白酶1 ml消化后按1:2或1:3的比例传代。以后每隔3～4 d换液，倒置相差显微镜逐日观察，待细胞融合铺满瓶底约80%～90%，重复上述操作。