张军卫，靳风烁，龚晋迁，彭东涛，王 刚

（1.重庆市第九人民医院泌尿外科，重庆 400700；2.第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科，重庆 400042）

膀胱肿瘤是泌尿系最常见的恶性肿瘤，以非肌层浸润性膀胱癌为主，其主要特点为复发率高。近来国内外大量实验及流行病学资料表明结直肠癌、前列腺癌和膀胱癌等多种人类肿瘤COX－2（环氧化酶－2）的表达明显增高，使用COX－2抑制剂可使肿瘤增殖抑制，但是其机制目前尚不清楚。本研究探讨环氧化酶－2反义核酸对膀胱癌细胞株裸鼠成瘤的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞、菌株及质粒 人膀胱癌T24细胞株由本室冻存；含hCOX－2 全长cDNA 质粒pCB7，由美国大学Dubinett教授馈赠；pcDNA3.1（＋）质粒、pMD18－T Vector购于大连宝生物工程有限公司。

1.1.2 人环氧化酶－2 反义核酸真核表达载体由本实验室的构建并鉴定。

1.1.3 裸鼠 6～8周龄BALB／c nu／nu裸鼠，均为雄性，由上海实验动物中心提供，本院动物室饲养。

1.1.4 主要试剂 脂质体lipofectAMINE 2000购自美国Roche 公司产品，胎牛血清购自美国Hyclone，鼠抗人COX－2单克隆抗体购自 北京中杉金桥生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞基因转染 应用脂质体介导的方法获得了稳定表达人环氧化酶－2反义核酸的膀胱癌细胞，并用抗生素筛选保证其稳定的表达，再通过免疫细胞化学与RT－PCR验证其COX－2蛋白及mRNA水平下调。

1.2.2 细胞培养人膀胱癌细胞株 T24、T24－AS、T24－P培养于含10%（体积分数）胎牛血清的RPMI 1640培养基，在37℃、5%CO2（体积分数）饱和湿度的条件下生长、传代。

1.2.3 裸鼠成瘤性实验 分为3组（T24、T24－AS、T24－P），每组9只裸鼠。取对数生长期的T24细胞，用PBS将细胞制成细胞悬液（2.5×107／mL），抽取0.2mL接种于裸鼠背部皮下，接种后于无特殊病原菌（SPF）条件下饲养。……