畅立斌 鲍永珍 黎晓新 肖林

晶状体上皮细胞(lens epithelial cells，LEC)的凋亡被认为是多种非先天性白内障形成的始发因素［1］，氧化损伤是诱导 LEC凋亡的重要因素之一。目前晶状体氧化损伤的研究集中在氧自由基方面，而分子氧如何影响LEC却报道甚少。高压氧(hyperbaric oxygen，HBO)能够显著提升组织内的氧含量，为人们研究氧气与白内障发生的关系提供一条有效途径。临床试验［2］与动物实验［3］结果提示，长期过量的HBO可以导致白内障的发生;细胞实验［4］表明，LEC暴露在HBO下会产生过多的氧自由基，使细胞停止分裂，死亡率达到50%，然而哪些细胞通路参与这一过程国内外鲜有报道。JNK在多种细胞的HBO损伤实验中被认为是一个重要的作用介质［5］。为了研究 HBO和过氧化氢(hydrogen peroxide，H2O2)对LEC的影响及JNK细胞信号通路在这一过程中的可能作用，本实验传代培养人LEC细胞系SRA01/04，并建立HBO与H2O2细胞氧化损伤模型，应用蛋白印迹法(Western-blot)检测氧化损伤时SRA01/04 细胞中 JNK/p-JNK、c-Jun/p-c-Jun、caspase 3、caspase 9的表达变化，从细胞通路角度阐明HBO诱导人LEC凋亡的机制。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂 流式细胞仪:美国BD公司;PTC-200基因扩增仪:美国 MZ.RESEARCH公司;CO2培养箱:德国 Heraeus公司;倒置显微镜 CK30:日本OLYMPUS公司;高速冷冻离心机:日本HITACHI公司。DNA Marker I:中国天为时代科技有限公司;JNK/p-JNK、c-Jun/p-c-Jun、caspase 3、caspase 9 抗体(美国Cell signaling公司);JNK2抑制剂SP600125(德国 Merck 公司);MTT、PI、RNase A(美国 Sigma公司);Annexin V-FITC试剂盒(武汉博士德有限公司);胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、MEM(Modified Eagle’s medium)培养液、非必需氨基酸均为美国Hyclone公司产品;细胞培养用耗材为美国Corning公司产品。

1.2 SRA01/04系细胞培养 LEC细胞系 SRA01/04细胞购自中国医学科学院基础医学细胞中心。用含体积分数10%FBS、0.5%非必需氨基酸的 MEM完全培养基培养，置于体积分数5%CO2、37℃的细胞培养箱内培养。……