庞战军，周君桂

0 引 言

在我们前期的研究中，为研究滋养层有节制侵入的分子机制，选择滋养层侵袭性正常的早孕绒毛和滋养层发育异常的完全性葡萄胎组织标本，采用抑制性消减杂交的方法，建立了完全性葡萄胎与正常早孕绒毛间的差示cDNA文库，以期筛选出在葡萄胎组织中异常表达的基因，从而进一步揭示滋养层侵袭性调节的分子机制。结果筛选到3条功能未知的基因片段，并获得了其中一条新基因F10(Gen-Bank登录号AB19629)的全长序列，经原位杂交实验证实其在葡萄胎组织中呈高表达［1］。荧光定量PCR实验的结果显示:F10在葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌组织中全部呈阳性表达，且按上述顺序F10阳性表达强度依次递增，提示F10基因可能与滋养细胞侵袭性有关［2］。另外证实，F10在子宫颈、子宫内膜等正常组织及癌旁组织不表达，在卵巢腺癌、子宫内膜癌、乳腺癌、肝癌、胃癌等腺癌中阳性表达，提示新基因F10不仅与滋养细胞肿瘤密切相关，还可能参与某些腺癌的发生［3－5］。为进一步研究F10基因的功能，我们拟构建F10基因的表达载体，分离纯化F10基因编码蛋白，为F10单克隆抗体的制备及表达研究提供基础。

1 材料与方法

1.1 试剂 Es Taq DNA Polymerase，T4 DNA Ligase，快速琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒，DH5α感受态细胞，BL21(DE3)感受态细胞，Rosseta(DE3)感受态细胞，质粒小提试剂盒，Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒，SDS×PAGE凝胶制备试剂盒，Protein Show-G250蛋白快速染色液，中分子量蛋白Marker，RPMI 1640培养基，胎牛血清，DMSO，ProteinShow-G250蛋白快速染色试剂(CWbio.Co.Ltd)。表达载体pET28a，限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ(Fermentas)。酶标仪，BIO-RAD 680;HD-4层析工作站，上海沪西仪器厂;层析柱，Phamacia;蛋白电泳装置，BioRadⅡ;蛋白定量检测仪，Amersham Biosciences。……