赖 静，顾 军，许 晶，吴 波，张文文，聂伟伟，宋 伟，汪泽兴，黄桂春，管晓翔

0 引 言

当前乳腺癌已经成为全球女性发病率和死亡率最高的恶性肿瘤［1－2］。其发病率在我国逐年上升且呈现年轻化趋势，在大中城市尤为明显。对乳腺癌的发生发展研究已成为目前的热点及重点。p53基因被认为是目前最重要的抑癌基因，具有抑制肿瘤细胞增长、阻滞细胞周期及促进凋亡的作用［3］。然而50%以上的肿瘤中存在p53基因突变现象，最终导致肿瘤的生长［4］。大量研究表明，野生型p53及突变型p53在乳腺癌的诊断和治疗中都发挥着重要作用［5－7］。本研究应用免疫组织化学方法检测p53在乳腺癌中的表达，研究其在乳腺癌的诊断和预后评估中的意义;并探讨了5-氮杂脱氧胞苷对p53表达调控的影响。

1 材料与方法

1.1 主要材料 组织芯片购于西安艾丽娜生物科技有限公司，包含80例乳腺癌组织、80例同一来源的癌旁正常组织。乳腺癌患者均为女性，年龄30～70岁。病理类型:浸润性导管癌72例、浸润性小叶癌2例、黏液腺癌2例、髓样癌3例、大汗腺癌1例。人乳腺癌细胞株MCF-7由本实验室保存。MCF-7细胞培养于含10%进口胎牛血清，1%双抗及0.05%胰岛素的1640培养液中，并置于37℃，含有5%CO2的细胞培养箱中培养，常规传代培养，取对数生长期细胞进行实验。

1.2 免疫组织化学及结果判定 常规组织芯片脱蜡入水，3%H2O2阻断内源性过氧化物酶10 min，充分水洗，置于pH 6.0的0.01 mmol/L构椽酸盐缓冲液中，高压加热修复抗原。滴加p53抗体后37℃孵育2小时;滴加二抗，室温孵育30 min。各步骤间以PBS冲洗5 min，连续3次。……