陈 亮，崔国忠，杨 猛，丁明剑,李铁军

(河北省沧州市中心医院,河北 沧州 061001)

三阴性乳腺癌(TNBC)是乳腺癌中的特殊类型，患者雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(C-erbB-2)均表达为阴性，针对激素受体的内分泌治疗和HER-2基因的分子靶向治疗对于三阴性乳腺癌均无效。三阴性乳腺癌较非三阴性乳腺癌的恶性度更高，预后更差。目前影响三阴性乳腺癌预后的分子指标逐渐成为研究的焦点。新发现的抑癌基因PTEN是继P53基因之后在人类肿瘤细胞中缺失和突变率最高的抑癌基因。乳腺癌中存在抑癌基因PTEN突变或缺失[1]，PTEN不但可抑制肿瘤细胞生长，而且能促进肿瘤细胞凋亡。大量研究证实，PTEN的缺失在乳腺癌中同样存在。本研究分析了PTEN蛋白在非三阴性乳腺癌及三阴性乳腺癌中的表达情况，并探讨PTEN蛋白与三阴性乳腺癌临床病理特征之间的关系，现报道如下。

1 临床资料

1.1一般资料 收集2000年8月—2005年4月于河北省沧州市中心医院住院治疗的130例三阴性乳腺癌及112例非三阴性乳腺癌患者的乳腺癌组织蜡块。按照美国癌症联合会2010年第7版乳腺癌分期标准及病理学分级标准对患者行TNM分期以及组织学分级。130例三阴性乳腺癌患者均为女性，年龄22～75(46.2±5.5)岁；临床分期：Ⅰ期34例，Ⅱ期56例，Ⅲ期40例；组织学分级：Ⅰ级36例,Ⅱ级50例，Ⅲ级44例；腋下淋巴结转移72例；有乳腺癌家族史45例。112例非三阴性乳腺癌患者均为女性，年龄25～70(45.2±6.3)岁；临床分期：Ⅰ期28例，Ⅱ期50例，Ⅲ期34例；组织学分级：Ⅰ级25例,Ⅱ级44例，Ⅲ级43例；腋下淋巴结转移58例；有乳腺癌家族史38例。2组患者年龄相似，具可比性。所有患者术前未行放化疗及内分泌治疗，术后根据患者情况接受规范的综合治疗。

1.2免疫组化方法 标本常规用10%甲醛固定、常规脱水、浸蜡、包埋、切片，切片厚度4 μm。采用免疫组化S-P法，依据说明书操作。用磷酸盐缓冲洗液0.01 mol/L、pH 7.4的PBS代替一抗作阴性对照，用已知PTEN阳性结肠癌组织作为阳性对照。PTEN单克隆抗体购于美国UCL公司。

1.3观察指标及标准 肿瘤直径采用RECIST标准，应用单径测量法测量。PTEN的判断：PTEN蛋白主要表达于细胞质，主要为棕黄色颗粒状。在每一切片中随机选取10个高倍镜视野，并且每个高倍镜视野要求计数100个细胞。染色强度：浅黄染为1分，棕黄染为2分，高强度黄染为3分。阳性细胞的比率：阳性细胞≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分。综合判断以强度与比率相加为准，≤2分计为低表达组，>3分计为高表达组。

1.4统计学方法 采用SPSS 17.0统计学软件进行统计学处理。计数资料比较采用2检验。检验水准为α=0.05。

2 结 果

2.1PTEN蛋白在三阴性乳腺癌及非三阴性乳腺癌中的表达情况 PTEN蛋白在三阴性乳腺癌组织中高表达49例，低表达81例，高表达率为37.7%；在非三阴性乳腺癌组织中高表达57例，低表达55例，高表达率为50.9%。两者之间高表达率比较差异有统计学意义(2=4.259,P=0.039)。

2.2PTEN蛋白表达与三阴性乳腺癌及非三阴性乳腺癌临床临床病理特征之间的关系 在三阴性乳腺癌中，PTEN的表达与临床分期、腋下淋巴结转移相关(P均<0.05)；临床分期Ⅰ期的患者其PTEN的高表达率高于Ⅱ期、Ⅲ期的患者(P均<0.05)；PTEN的表达与年龄、肿瘤大小、乳腺癌家族史及组织学分级无关(P均>0.05)。在非三阴性乳腺癌中，PTEN的表达与腋下淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、肿瘤大小、乳腺癌家族史、临床分期及组织学分级无关(P均>0.05)。见表1及表2。

3 讨 论

三阴性乳腺癌具有侵袭性强、复发早、进展快、生存时间短及易于侵袭转移等临床生物学行为。目前，化学治疗虽然是其主要治疗手段，但与其他类型乳腺癌相比预后较差。因此针对三阴性乳腺癌的基础研究、新治疗的探寻及临床预后等方面的研究引起越来越多的重视。PTEN基因是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，其不但可抑制肿瘤细胞生长，也能促进肿瘤细胞凋亡。在许多肿瘤中，PTEN基因区域有杂合性丢失和突变，抑制肿瘤作用减弱或消失，从而促进肿瘤的发生、发展及转移。同样，乳腺癌中也存在PTEN基因的缺失和突变，并且这些现象可以作为判断预后的指标。

表1 PTEN蛋白在三阴性乳腺癌中的表达及与临床病理特征的关系

表2 PTEN蛋白在非三阴性乳腺癌中的表达及与临床病理特征的关系

Vitolo等[2]研究报道，50%～75%的乳腺癌患者中出现了PTEN的表达缺失或PI3K的激活，说明PTEN的表达缺失在乳腺癌发生中具有重要的作用。方茅等[3]研究报道，TNBC组织中PTEN阳性表达率为27.9%,而正常乳腺组织中为100.0%，TNBC组织中PTEN阳性表达率显著低于正常乳腺组织。本研究显示，PTEN蛋白在三阴性乳腺癌组织中的阳性表达率明显低于非三阴性乳腺癌组织，提示无论三阴性乳腺癌还是非三阴性乳腺癌中均存在着PTEN蛋白的缺失；并且三阴性乳腺癌中PTEN的表达明显低于非三阴性乳腺癌，提示PTEN蛋白表达在三阴性乳腺癌组织中较非三阴性乳腺癌进一步减弱，可能是由于抑癌基因PTEN出现了更多缺失和突变的结果。说明PTEN的异常缺失在参与三阴性乳腺癌的发生发展过程中可能较非三阴性乳腺癌发挥着更加重要的作用。本研究结果还显示：无论是在三阴性乳腺癌还是在非三阴性乳腺癌中，PTEN的蛋白表达均与年龄、肿瘤大小、乳腺癌家族史及组织学分级无关，而与腋下淋巴结转移有关，说明可能随着恶性度的增加，PTEN的蛋白表达逐渐降低，并且在三阴性乳腺癌中，临床分期I期的患者其PTEN的高表达率高于Ⅱ期及Ⅲ期的患者，提示PTEN的表达缺失可能在三阴性乳腺癌的恶性演变过程中较非三阴性乳腺癌扮演着更为重要的角色。而方茅等[3]报道发现，PTEN在TNBC组织中的表达与腋窝淋巴结转移、组织学分化和TNM分期密切相关，本研究与以上报道基本一致。说明可能PTEN表达的水平越低，肿瘤恶性度越高，越容易出现浸润和转移。Jones等[4]报道，PTEN在完全丧失状态与乳腺癌ER阴性显著相关，特别是基底细胞样型。本研究得出相似的结论，说明PTEN蛋白的缺失在三阴性乳腺癌中更为明显。

李志雄等[5]通过免疫组化法检测食管鳞癌中PTEN表达并行回归分析，结果显示PTEN阳性患者5 a生存率明显高于PTEN阴性表达者，成为不良的预后因素。PTEN的表达缺失在胶质瘤[6]、非小细胞肺癌[7]、大肠癌[8]、宫颈癌[9]、肝内胆管细胞癌[10]及胃癌[11]中同样成为不良的预后因素，这与PTEN在乳腺癌中的表达相一致。

综上所述，PTEN的缺失表达可能与三阴性乳腺癌及非三阴性乳腺癌的发生及发展均有一定相关性，而与三阴性乳腺癌的相关性更强。PTEN可能是影响三阴性乳腺癌预后的因素，检测PTEN蛋白在三阴性乳腺癌组织中的表达可以作为判断肿瘤浸润进展及预后的分子标志物。

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[11] 马鹏,曹晓燕,冯义朝. PTEN蛋白表达与胃癌预后的关系[J]. 延安大学学报：医学科学版,2010,8(2):1-2