李彦东 李 沫 苏亚楠

(东北林业大学医院检验科，黑龙江 哈尔滨 150040)

阿尔茨海默病(AD)早期病理特征最主要的表现是细胞外β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积所导致的老年斑(SP)的形成和神经元纤维缠结(NFTs)。双股螺旋纤维(PHF)是NFTs的主要成分，异常磷酸化的tau蛋白则是导致PHF形成的最主要因素。AD患者神经元变性时，大量的细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)5被激活因子(p35、p39、p25等)所激活，激活的CDK5大量催化tau蛋白分子中连有脯氨酸的丝氨酸或苏氨酸残基的磷酸化，从而导致tau蛋白的磷酸化，最终促进退行性病变的发生和发展。本实验观察人参皂苷Rg1对AD模型大鼠海马的CDK5和磷酸化tau(p-tau)的表达影响，并探讨其对AD模型大鼠的保护作用。

1 材料和方法

1.1实验动物和分组 健康SD大鼠60只，3月龄，体重250～300 g，购置于哈尔滨医科大学实验动物中心，常规饲养。随机分为青年组、模型组、人参皂苷Rg1小剂量组和人参皂苷Rg1大剂量组，每组15只。

1.2主要药物和试剂 D-半乳糖溶液、Aβ1～40(上海江莱生物科技有限公司)；抗体CDK5和抗磷酸化p-tau(Ser404)(北京博奥森生物技术有限公司)。人参皂苷Rg1，纯度≥98%(上海纯优生物科技有限公司)。

1.3造模与用药 D-半乳糖溶液50 mg/kg大鼠腹腔注射，连续注射6 w后施行海马区注射〔1〕，每侧注入Aβ1～40溶液1 μl。术后连续3 d腹腔注射青霉素10万U/d。造模成功后，人参皂苷RgH剂量组给予人参皂苷Rg1 20 mg·kg-1·d-1灌胃，人参皂苷Rg1大剂量组给予人参皂苷Rg1 40 mg·kg-1·d-1灌胃，青年组和模型组以等量生理盐水灌胃，灌胃体积为20 ml/kg，1次/d，连续30 d。

1.4取材与检测 造模成功的AD大鼠用药30 d后，断头取双侧海马，一侧海马制作石蜡切片，应用免疫组织化学(SABC法)检测CDK5和p-tau(Ser404)的表达情况，阳性表达为胞质内呈现棕黄色颗粒。……