刘 军 肖 军 张山锋 毛 唯 杨钟华

(武汉市普爱医院骨外科，湖北 武汉 430030)

多发性骨髓瘤是终末分化的浆细胞异常克隆性增生的恶性血液系统肿瘤，是一种低凋亡活性的分子克隆性疾病，伴随着对癌基因激活和抑癌基因失活的深入, 基因治疗被引入肿瘤治疗的方法中。流行病学研究发现，p73基因在健康人骨髓中低表达，而在骨髓瘤患者中高表达，在轻链型骨髓瘤表达明显高于在其他亚型骨髓瘤中的表达，而且p73基因的表达与骨髓瘤的分期呈正相关〔1〕。本研究通过siRNA干扰技术抑制骨髓瘤细胞系U2OS中p53基因的表达，在削弱p53表达的遗传背景下，观察TAp73和DNp73对顺铂诱导的U2OS细胞株增殖抑制和细胞凋亡的影响，并初步探讨相关作用机制。

1 材料与方法

1.1主要试剂和细胞株 人骨髓瘤细胞株U2OS购买于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。胎牛血清、MEM培养基均为美国Gibco公司产品。顺铂(P4394)购自美国Sigma公司。p53基因siRNA序列由上海吉玛制药技术有限公司设计并合成。RIPA蛋白裂解液(强型)和ECL化学发光液均购自江苏碧云天生物技术研究所。β-actin、TAp73、DNp73、Bax和Bcl-2抗体购自美国Bioworld Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒购自杭州联科生物技术有限公司。脂质体转染试剂Lipo2000购自美国Invitrogen公司。四甲基氮唑蓝(MTT)购自美国Sigma-Aldrich公司。羊抗鼠和羊抗兔二抗均购于武汉博士德生物工程有限公司。

1.2方法

1.2.1细胞培养 U2OS细胞培养于含10%胎牛血清的MEM培养基，经0.25%胰蛋白酶消化传代后置含5%CO2的37℃培养箱内培养，每2天传代1次。

1.2.2p53 siRNA转染U2OS细胞 由上海吉玛制药设计并合成特异性针对p53基因mRNA的siRNA序列和阴性对照siRNA序列。……