王冬梅 赵 丹 殷盛明 李盛龙 徐 红 傅 雷 宫得正 于德钦 孟 旭

(大连医科大学机能实验室，辽宁 大连 116044)

帕金森病(PD)是中老年人常见的进行性中枢神经系统退行性疾病，其临床表现为静止性震颤、运动迟缓、肌肉僵直、步态紊乱及体位不平衡等〔1，2〕。此病主要病理特征为黑质多巴胺能神经元缺失及胞质内路易小体出现。PD的确切病因目前还不清楚，一般认为与多种因素有关，包括遗传、环境、衰老等。近年来研究发现,PD不仅与黑质纹状体系统多巴胺含量减少有关,可能也与阿片受体在中枢神经系统中代谢障碍有关。有关kappa受体表达异常是否参与MPTP小鼠的发病机制尚未见报道。为进一步探讨本病的发病机制,以C57BL/6小鼠皮下注射MPTP成功诱发PD模型，观察不同脑区的kappa受体表达的改变，探讨MPTP对 C57BL/6小鼠脑内kappa受体免疫反应的影响。

1 材料和方法

1.1动物分组 选取健康C57BL/6小鼠(大连医科大学动物实验中心提供)，24只，雌雄各半，体重18～22 g，随机分为模型组(MPTP+NS)、对照组(NS+NS)。模型组每日上午11∶30皮下注射MPTP(溶于三蒸水，pH8.5)20 mg/kg,连续8 d，对照组给等量生理盐水，连续8 d。

1.2免疫组织化学实验 动物经4%水合氯醛(400 mg/kg,i.p.)麻醉，1%和4%的多聚甲醛灌流，取脑放入4%的多聚甲醛中固定，含30%蔗糖的磷酸盐缓冲液(PBS)中4℃过夜，切取50 μm厚的冠状脑片，PBS漂洗10 min×2，与1%BSA孵育30 min；加入第一抗体(kappa-Ab，1∶100)4℃孵育过夜，PBS漂洗10 min×2；分别与相应的生物素化羊抗兔二抗(1∶400)室温振荡孵育1 h，PBS漂洗10 min×2；与卵白素化生物素复合物A∶B ∶PBS(1∶1∶400)室温振荡孵育2 h，二氨基联苯胺(DAB)法显色。空白对照脑片第一抗体以PBS代替。HPIAS系列彩色病理图文分析系统定量计数kappa受体阳性细胞。……