温 娜 唐泽波 张 宇 刘兴吉 金 宏 齐 玲 于洪泉

(吉林医药学院基础医学院，吉林 吉林 132013)

神经胶质瘤是颅内最常见的原发性肿瘤，以恶性居多〔1，2〕。胶质瘤一经发现，即处于晚期，很多患者不能手术，因此化疗在胶质瘤治疗中占极为重要的地位。五味子多糖(CPSC)就是从五味子成熟干燥果实中提取出来的，具有多种药理活性的复合物。研究表明CPSC具有抗肿瘤活性〔3～6〕，但其抗肿瘤作用机制尚不清楚。本课题组前期研究发现CPSC可以抑制胶质瘤细胞的生长〔7〕。本文将进一步研究CPSC对体外培养裸鼠胶质瘤细胞凋亡的作用及其机制。

1 材料与方法

1.1细胞和主要试剂 裸鼠胶质瘤细胞本实验室提取；CPSC(北华大学提供)；细胞培养基RPMI1640 (Thermo公司)，小牛血清和0.25%胰蛋白酶(美国Gibco公司)，Bax、Bcl-2抗体(北京中杉公司)。

1.2提取原代裸鼠胶质瘤细胞 复苏及培养裸鼠胶质瘤细胞，以2×106/75 cm2密度将细胞接种于培养瓶中，37℃、5%CO2及饱和湿度下培养，每隔1～3 d换液1次。

1.3ELISA法测定裸鼠胶质瘤细胞培养上清中Bax和Bcl-2蛋白表达 将裸鼠脑肿瘤细胞以1×104/ml密度接种于24孔培养板中，实验分为对照组(不含药物)和CPSC组(200，400，800 μg/ml)，药物作用48 h，每组设5个复孔。取细胞培养上清，将上清液与包被液按1∶1比例包被后4℃过液。封闭后加入Bax和Bcl-2抗体(1∶500稀释)于4℃过夜。加入二抗室温下孵育2 h，加显色液室温避光显色。于自动酶标仪492 nm处测定A值，并计算Bax和Bcl-2比值。

1.4细胞免疫组织化学法检测Bax和Bcl-2蛋白在裸鼠胶质瘤细胞阳性表达率 按上述方法和分组用不同剂量CPSC作用细胞48 h后，吸出培养上清，取出玻片，10%甲醛溶液固定30 min，灭活后一抗过夜，二抗室温孵育2 h，二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木素复染，常规脱水、透明、封片。……