于 爽 察雪湘 吴 瑶 冯国清

(郑州大学基础医学院药理学教研室，河南 郑州 450052)

巴戟天糖链是巴戟天醇提物水溶性部分中的主要有效成分，研究发现在经典成骨诱导组(地塞米松、维生素C和β-甘油磷酸钠)中使用巴戟天水提取物和巴戟天醇提取物含药血清能显著促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化作用〔1〕。但巴戟天寡糖对成肌细胞增殖分化的研究，目前尚未见报道。本实验研究巴戟天糖链诱导成肌细胞分化为心肌样细胞的作用及机制。

1 材料与方法

1.1动物、药品与试剂、仪器 新生1～3 d SD大鼠(合格证号：410116)，雌雄不限，由河南省实验动物中心提供。巴戟天(购自广东省德庆县药材公司，一等品，河南省药品检验所李杰鉴定) 生药15 kg 粉碎后，分次用体积分数为0.70的乙醇在90℃水浴中煮60 min，将乙醇提取液旋蒸回收乙醇，得浓缩液。用适量的蒸馏水稀释后，分别用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，弃去乙醚、乙酸乙酯、正丁醇可溶部分，得到醇提物的水溶部分，用层析柱方法分离收集糖链部分，其纯度为98.76%。Desmin抗体由武汉博士德公司出品；PCRKit(AMV)Ver.2.1试剂盒由TaKaRa 公司出品；200 bp DNA Ladder Marker；GATA-4、β-actin引物由上海生工公司合成。HERA cell二氧化碳培养箱(德国GmbH公司)，PCR扩增仪(Sigma公司)；数码凝胶图像处理系统(UVI公司)。

1.2方法

1.2.1乳鼠后肢骨骼肌成肌细胞的培养〔2〕无菌条件下剪取SD大鼠后肢骨骼肌，剪成1～2 mm3的碎块，用含抗生素的磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3次，每次静置1 min并弃上层液。加入浓度为0. 05 %的Ⅱ型胶原酶，37 ℃消化约40 min，1 000 r/min离心10 min，弃上清，再加入0.125%胰蛋白酶，37 ℃消化30 min，立即加入少许PBS液中止消化， 1 000 r/min离心10 min，弃上清，加入PBS液轻轻吹打，100目尼龙网过滤，收集滤液。……