杨 玉 商 宇 陈珏晓 徐 鹏 卢晓潇 孙志博 张 丽 邵文武 张鹏霞

(佳木斯大学医学院，黑龙江 佳木斯 154007)

齐墩果酸(OA)是中药女贞子的主要成分。研究表明，OA具有诱导人白血病原髓细胞株(HL-60)细胞凋亡及细胞周期阻滞的作用〔1～3〕，但是其诱导凋亡的机制尚不完全清楚。本实验检测线粒体凋亡信号通路关键蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-9、Smac/DIABLO、细胞色素C(Cyt-c)和凋亡诱导蛋白(Bid)表达，研究其对线粒体凋亡信号通路的干预作用，探讨OA诱导HL-60细胞凋亡的机制，为应用OA治疗白血病提供实验依据。

1 材料与方法

1.1药品与主要试剂 人早幼粒系白血病HL-60细胞购自中国科学院上海细胞库。抗Caspase-9抗体购自美国Oncogene公司，抗Smac/DIABLO抗体购于上海康成生物工程有限公司，抗Cyt-c抗体购于北京博奥森生物技术有限公司，抗Bid抗体与抗β-Actin抗体均为美国Santa cruz公司产品。苯甲基磺酰氟(PMSF)与丙烯酰胺购自美国Sigma公司。

1.2方法

1.2.1药物配制 OA溶于二甲基亚矾(DMSO)中，用含新生牛血清的RPMI-1640稀释，配制成最终浓度800 μmol/L的储存液。常规方法配制蛋白质免疫印迹法试剂。

1.2.2细胞培养与分组 HL-60细胞接种于培养瓶，加入含有胎牛血清、青霉素、链霉素的RPMI-1640培养液，置于5%CO2饱和湿度培养箱培养，2～3 d传代一次。实验设空白对照组与OA用药组。空白对照组：HL-60细胞培养于含0.05%DMSO的RPMI-1640培养基。OA用药组：按照前期实验结果，选择80 μmol/L OA处理HL-60细胞12、24、48 h。

1.2.3细胞总蛋白的提取及Caspase-9测定 分别收集对照组和OA用药组细胞。冷磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤，PBS重悬细胞并转移细胞至Ep管，加入细胞裂解液，冰浴，离心，取上清，蛋白浓度经二奎啉甲酸(BCA)法测定。……