张 哲 赵志英 王 超

(河北省人民医院 河北省老年医学重点实验室，河北 石家庄 050051)

长期胰岛素抵抗与糖尿病、肥胖及高血压等心血管疾病的发病密切相关，而骨骼肌是胰岛素刺激下机体摄取并利用葡萄糖的主要靶器官〔1〕。线粒体融合蛋白(Mfn)2是表达在线粒体外膜上的一个具有多重生物学活性的细胞内分子，具有促进线粒体融合并维持线粒体形态和功能的作用。近年来研究发现，在多种胰岛素抵抗的动物及细胞模型中均存在Mfn2表达减低，充分证实了线粒体损伤和功能异常是胰岛素抵抗发生的重要病理机制〔2，3〕。Krüppel样因子(KLF)4是一种锌指蛋白转录因子，在细胞增殖、分化、血管形成、肿瘤发生发展中发挥广泛的调控作用〔4〕。有研究发现KLF4可直接与Mfn2基因的启动子序列结合促进Mfn2的表达，二者共同参与血管平滑肌细胞的分化〔5〕。然而，KLF4在骨骼肌胰岛素抵抗中的作用目前尚未见报道。本实验旨在观察KLF4/Mfn2对胰岛素抵抗的影响。

1 材料与方法

1.1材料 L6骨骼肌细胞株购自中国协和医科大学细胞中心。α-MEM、胎牛血清(FBS)、牛血清白蛋白(BSA)、胰蛋白酶购自美国GIBCO公司。青霉素、链霉素、棕榈酸、葡萄糖氧化酶试剂盒购自上海生工生物工程技术服务有限公司。兔抗KLF4、Mfn2、胰岛素受体(IR)、GLUT4、GAPDH多克隆抗体购自美国Sigma公司。转染试剂Lipofectamin 2000购自Invitrogen 公司。辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG抗体、BCA蛋白浓度测定试剂盒、高灵敏度化学发光检测试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司。Trizol、RT-PCR试剂盒购自Promega 公司。PCR引物及靶向Mfn2 mRNA的siRNA由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。……