李日恒 张爱民 宋艳敏 赵立华 李 娟 张 娜 张 涛 陈 治 吴建飞 谢天浩 安宇亮 程树杰

(河北大学附属医院，河北 保定 071000)

结直肠癌发病是多基因、多因素共同参与的结果，其治疗除了手术、放化疗、中药等方法外，人们也积极致力于研究其他治疗方式，如基因治疗，其理论基础为癌基因与抑癌基因的失衡是导致肿瘤形成的重要原因。survivin是凋亡抑制蛋白家族(IAP)中的一员,在人的胚胎、胸腺、生殖腺、甲状腺、神经干细胞、结肠上皮细胞等正常组织少量存在，在多种恶性肿瘤组织中高表达，在人类正常分化的组织中不表达〔1～4〕。相关研究表明，survivin高表达的肿瘤预后差〔5～8〕。本研究通过RNA干扰(RNAi)技术将肿瘤相关基因survivin沉默，抑制结直肠癌细胞，探讨survivin-siRNA重组腺病毒质粒最佳抑制浓度和时间。

1 材料和方法

1.1材料 已构建成功的重组腺病毒质粒pBAsi-survivin，人类结直肠癌细胞株SW480(中国医学科学院肿瘤细胞库)培养基 RPMI1640，5%胎牛血清，0.25%胰酶(北京清大天一科技有限公司)。

1.2仪器 低温高速离心机(湖南湘立科技仪器有限公司)，核酸电泳仪、电泳槽、垂直板电泳槽、电转仪(北京六一仪器厂),紫外分光光度仪(上海精密仪器有限公司)。PCR仪(Thermo 北京科誉兴业科技发展有限公司)，Trizol试剂，PrimerScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit试剂盒，survivin引物和内参GAPDH引物均由大连宝生物公司合成及提供。

凝胶成像系统(Biorad GelDoc XR 上海旦鼎国际贸易有限公司)，水平摇床(上海乔跃电子有限公司)。PVDF膜，封闭液,洗脱液、脱脂奶粉,一抗、酶标二抗，显色液，显影定影液，蛋白提取液及相关抗体(碧云天生物研究所)。……