王 艺 徐剑铖 毛 梅 李秋梅 田 静 苏 磊

肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AM))是肺部炎症反应的主要始动细胞，也是脂多糖(lipopolysacharide,LPS)的主要效应细胞，其表面表达有多种模式识别受体可以识别结合LPS，启动跨膜和细胞内信号传导，引起多种炎症介质和细胞因子如肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的释放，从而导致过度炎症反应和急性肺损伤(acute lung injury，ALI)[1-3]。核仁素(nucleolin，由C23基因编码)是真核细胞核仁中含量最丰富的一种蛋白质，它是一种穿梭蛋白，可以自由穿梭于细胞核、细胞浆和细胞膜之间，具有多种生物学功能，参与了细胞周期的调节，并在病原微生物的感染和自身免疫系统疾病中也发挥一定的作用[4]。目前大量研究表明核仁素在单核-巨噬细胞系统膜表面广泛分布并且参与了LPS所致炎症反应[5-8]。我们前期的研究发现正常大鼠AM膜表面表达有核仁素，体外实验证实其参与了LPS的内化及对AM的激活，它可能是LPS的一种新的膜识别受体[9]。

本实验拟在体应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术，通过气管滴入的方法转染针对核仁素的shRNA表达载体，干扰大鼠AM膜核仁素的表达，观察其对LPS所致ALI大鼠的保护作用，为阐明AM膜核仁素在LPS诱导ALI中的作用及机制提供实验依据。

材料与方法

一、试剂和动物

成年清洁级SD大鼠，体质量(200±20)g，购自第三军医大学实验动物中心。重组质粒pBS-U6.C23shRNA及对照质粒pBS-U6.ControlshRNA由美国Ambion公司合成，jetPEITM转染试剂购自法国Polyplus-transfection公司，LPS(E coli O55:B5)购自美国Sigma Invitrogen公司，大鼠TNF-α和IL-6 ELISA试剂盒购自晶美生物科技公司，抗鼠C23抗体、抗NF-κBp65抗体及PVDF膜购自SantaCruz公司，蛋白定量BCA法试剂盒和细胞膜、细胞核蛋白提取试剂盒均为碧云天生物技术公司产品。……