★ 钟莉银 刘红宁 朱卫丰 王森 沈冬冬

(1.江西中医药大学现代中药制剂教育部重点实验室 江西 南昌 330004；2.上海百安制药有限公司 上海 201501)

盐酸特比萘芬乳膏为皮肤科用药类非处方药，能高度选择性地抑制真菌麦角鲨烯环氧化酶，阻断真菌细胞膜形成过程中的麦角鲨烯环氧化反应而干扰真菌固醇的早期生物合成，从而发挥抑制和杀灭真菌的作用。盐酸特比萘芬乳膏用于治疗手癣、足癣、体癣、股癣及花斑癣有效性和安全性已得到证实[1-3]，值得临床推广应用。苯甲醇在盐酸特比萘芬乳膏中为防腐剂，有麻痹作用，对眼部、皮肤和呼吸系统有强烈的刺激作用，吞食、吸入或皮肤接触均对身体有害[4]，故控制苯甲醇含量对盐酸特比萘芬乳膏的质量至关重要。

目前苯甲醇的含量测定中国药典采用氢氧化钠滴定法，方法准确性不高，近年来对苯甲醇的检测主要集中在注射剂和化妆品方面，检测方法有高效液相色谱法和气相色谱法。2009年中国国家标准化管理委员会发布了化妆品中防腐剂苯甲醇的气相色谱法。本文采用气相色谱法，以苯甲酸甲酯未内标物，检测盐酸特比萘芬乳膏中苯甲醇的含量，方法简便、准确，精密度高。

1 仪器与试药

1.1 仪器 GC112A气相色谱仪，配有氢火焰离子化检测器FID(上海精密科学仪器有限公司)；Sartorius BS124S 和BT25S 电子天平；KQ-100E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药 对照品苯甲醇(批号：20120309，纯度99.85%)和苯甲酸甲酯(批号：WTN20111207，纯度99.84%)均购自国药集团化学试剂有限公司，气相色谱纯；无水乙醇，分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；盐酸特比萘芬乳膏(批号为121101，121102，121103)与不含苯甲醇的空白基质均由上海百安制药有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 内标溶液 取苯甲酸甲酯500 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，配成5.0 mg/mL的内标溶液。

2.1.2 苯甲醇标准储备液及对照品溶液 取苯甲醇对照品500 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，配成5.0 mg/mL的标准储备液。精密量取苯甲醇标准储备液5.0 mL，置50 mL量瓶中，精密加入内标溶液5.0 mL，加无水乙醇稀释至刻度，即得浓度为0.5 mg/mL的苯甲醇对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液 取盐酸特比萘芬乳膏1.25 g，精密称定，置50 mL量瓶中，精密加入内标溶液5.0 mL，加无水乙醇适量，超声，使溶解，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，置冰浴中放置10 min，滤过，取续滤液，即得。

2.1.4 空白基质溶液 按处方量制备缺苯甲醇的空白基质，精密称取1.25 g置50 mL量瓶中，加无水乙醇适量，超声，使溶解，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，置冰浴中放置10 min，滤过，取续滤液，即得。

2.2 色谱条件 色谱柱：SE-54毛细管色谱柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm)；色谱柱升温程序：初始100 ℃，维持3 min，以10 ℃/min的速率升至200℃后，保持2 min，再以40 ℃/min升至250 ℃，保持10 min；进样口温度：200 ℃；FID检测器温度：250 ℃；载气：高纯N2，流速30 mL/min；进样量：1.0 μL；按上述色谱条件进行测定，结果样品中各色谱峰均达到基线分离，苯甲醇峰与苯甲酸甲酯的保留时间(tR)分别约为5.3和6.4，分离度为16.8，空白未加内标的基质溶液在与苯甲醇、苯甲酸甲酯相同位置处无干扰峰，表明样品中其他成分对苯甲醇与苯甲酸甲酯的测定无干扰，见图1。

A.对照品溶液；B.供试品溶液；C.空白基质溶液；D.及内标溶液；1.苯甲醇；2.苯甲酸甲酯

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 分别精密量取上述苯甲醇标准储备液一定量，置于50 mL容量瓶中，精密加入内标溶液5.0 mL，用无水乙醇稀释至刻度，配制成浓度为0.1001, 0.2003, 0.3004, 0.5006, 1.0013mg/mL系列标液。按上述色谱条件，进样1 μL，记录色谱图，以苯甲醇浓度为横坐标(X)，苯甲醇峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，进行回归分析，得回归方程Y=2.4287X-0.0042,r=1。结果表明，苯甲醇浓度在0.1001～1.0013 mg/mL 范围内呈良好的线性关系。

2.3.2 精密度试验 精密吸取对照品溶液(苯甲醇、苯甲酸甲酯浓度分别为0.5006,0.5002 mg/mL)1 μL，连续进样6次，记录峰面积，苯甲醇与内标峰面积比的RSD为0.45%，表明仪器精密度良好。

2.3.3 重复性试验 精密称取同一试样(批号：121101)6份，每份1.25 g，制备成供试品溶液，按上述色谱条件，分别进样1 μL，记录色谱图，计算苯甲醇的含量(标示量%)，测定苯甲醇平均含量为2.00%，RSD为0.65%(n=6)。

2.3.4 稳定性试验 取样品(批号：121101)制备成供试品溶液，在室温下放置，于0 ，2 ，4 ，6 ，8 ，10 ，12 h进样1 μL，记录色谱峰面积，所得苯甲醇峰面积与内标峰面积比的RSD为0.6%，表明供试品品溶液在12 h内基本稳定。

表1 回收率试验结果(n=3)

2.3.5 回收率试验 精密称取不含苯甲醇的盐酸特比萘芬乳膏空白基质1.25 g，置50 mL容量瓶中，一式9份，以3份为一组，分别精密加入苯甲醇标准储备液(苯甲醇浓度为5.006 mg/mL)4.0，5.0，6.0 mL，制备成低(80%)、中(100%)、高(120%)三种浓度的供试品溶液，进样1 μL，计算苯甲醇回收率，结果见表1。

2.3.6 样品测定 应用所建立的分析方法，对3批盐酸特比萘芬乳膏样品进行分析，每批样品平行制备2份供试品溶液，计算3批样品中苯甲醇含量。结果批号为121101，121102，121103的盐酸特比萘芬乳膏中苯甲醇的含量分别为2.00%，2.02%，1.99%。

3 讨论

3.1 色谱条件的选择 本实验根据苯甲醇的性质和盐酸特比萘芬乳膏基质的特点，选用弱极性的SE-54毛细管柱(5%二苯基-95%聚二甲基硅氧烷)，采用程序升温，200 ℃的进样口温度和250 ℃的检测器温度。由于乳膏基质中成分复杂，难挥发物较多，本实验将盐酸特比萘芬乳膏基质中的所有成分按该色谱条件进样分析，发现基质成分中的甘油峰出现在溶剂峰与苯甲醇峰之间，其他基质成分峰均在目标色谱峰之后，故在目标色谱峰出完后，保持数分钟，再以40 ℃/min升至250 ℃，保持10 min，挥出残留组分，以免影响下一样品的分析。

3.2 溶剂的选择 因苯甲醇能与无水乙醇混溶，且在实验中发现在样品取样量下，盐酸特比萘芬乳膏中各组分均能溶于无水乙醇，同时无水乙醇无毒、价廉，故选用无水乙醇作为溶剂。

3.3 内标物质的选择 试验曾将乙二醇、环己醇和苯甲酸甲酯作为内标进行实验，根据保留时间、峰面积和分离度等因素，最终选择苯甲酸甲酯作为内标物质。

[1]Hans Christian Korting, Peter Kiencke, Sandra Nells, et al. Comparable Efficacy and Safety of Various Topical Formulations of Terbinafine in Tinea Pedis Irrespective of the Treatment Regimen[J]. Am J Clin Dermatol, 2007,8(6):357.

[2]王爱平，李若瑜，曾凡钦，等. 1%盐酸特比萘芬软膏治疗浅部真菌病随机双盲对照多中心临床试验[J]. 临床皮肤科杂志，2001,30(4)：247.

[3]王恂，曾跃斌，许金华. 1%盐酸特比萘芬乳膏治疗浅部真菌病临床观察[J]. 中国现代医学杂志,2007,17(8):978.

[4]田富饶，王旭强，郑瀚.高效液相色谱-紫外检测器法测定化妆品中的苯甲醇[J]. 化学分析计量，2011,20(5)：63-65.