★ 黄文平 黄陆强 宋永贵, 肖光清 黎田儿 李志峰,

(1.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 江西 南昌 330006；2.江西中医药大学 江西 南昌 330004)

柿蒂为柿树科植物柿DiospyroskakiThunb.的干燥宿萼。冬季果实成熟时采摘，食用时收集，洗净，晒干。其苦、涩，平；归胃经。有降气止呃功能，常用于胃寒气滞的呃逆。临床治疗顽固性或术后呃逆，反流性胃炎等症[1]。中国药典2010年版柿蒂项下无含量测定项，虽有文献[2]报道了柿蒂中没食子酸的含量测定，但所用的药材比较单一，无法验证其方法的可行性，本文在对其方法进行改进基础上，对不同产地柿蒂中没食子酸含量进行测定，即比较了不同产地柿蒂药材质量，又为2015年版中国药典柿蒂含量测定项的建立提供基础研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC-10AT型高效液相色谱仪DAD检测器；自动进样器；AUW220D十万分之一分析天平(日本岛津公司)；KQ-250型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药 乙醇、磷酸(分析醇，上海振兴化工一厂)；甲醇(色谱纯，山东禹王实业有限公司禹城化工厂)；水为超纯水。柿蒂药材分别采集于江西、河北等地，样品经江西中医药大学中药资源中心钟国跃鉴定为柿树科植物柿DiospyroskakiThunb.的干燥宿萼。

1.3 对照品 没食子酸对照品(含量大于98%，批号：M05-20130113，中国药品生物制品检定所)。

2 方法与结果

2.1 柿蒂药材供试品溶液 取干燥柿蒂粉末(过3号筛)0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，精密称定重量,超声20min，冷却，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，静置，取上清液过0.45μm微孔滤膜后,即得。

2.2 对照品溶液制备 取没食子酸对照品适量，精密称定，用50%甲醇制成每1mL并定容至刻度，制成含0.00776mg的溶液。

2.3 色谱条件 色谱柱为Cosmosil C18(4.6mm×250mm，5μm)，流速：1.0mL/min；检测波长273nm；柱温25℃。流动相为甲醇-0.5%磷酸溶液(5∶95)。在此色谱条件下，测定没食子酸对照品、柿蒂药材供试品，色谱图见图1。

A.柿蒂药材供试品；B.没食子酸对照品

由图1可见，柿蒂药材供试品溶液中没食子酸保留时间约为11.3min，且与相邻峰的分离度均大于1.5，对称性接近于1，可用于定量分析。

2.4 线性关系试验 精密吸取对照品溶液2，7，10，15，20，25μL注入色谱仪，按上述色谱条件进行测定，以峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X)为横坐标进行线性回归，得回归方程为没食子酸0.01552～0.194μg，Y=2.83×109X-4.86×103，r=0.999(n=6)，提示没食子酸在0.01552～0.194μg范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液10μL，连续重复6次，测定峰面积，其RSD为0.30%，表明精密度良好。

2.6 稳定性实验 精密吸取同一浓度的样品溶液分别于0，1，2，4，6，12 h各取10μL进样，结果样品在12h内稳定，没食子酸的RSD为1.19%。

2.7 重复性试验 按“2.1”项下方法制备6份供试品溶液，照样品测定方法测定没食子酸的含量，结果没食子酸的RSD为0.69%，表明该方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验 分别取已知含量的同一批样品约0.4g六份，精密称定，置具塞锥形瓶中，按含有80%、100%、120%的量加入没食子酸对照品一定量，按“2.1”项下方法进行处理，按样品测定方法测定没食子酸含量，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率实验结果

2.9 样品的含量测定 取10批不同柿蒂药材，分别照“2.1”项下方法平行制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，每份进样3次，计算各没食子酸含量的质量分数，结果见表2。

表2 十批柿蒂药材含量测定(%)

3 结论与讨论

根据指示性成分的理化性质，考察了50%甲醇、70%乙醇以及流动相作为溶媒对测定结果的影响，结果发现采用50%甲醇作为溶媒，没食子酸的保留率比较大；比较了超声提取与冷浸法进行没食子酸提取的考察，发现超声提取法没食子酸的溶出率大。经试用甲醇-0.5%磷酸(1∶99)，甲醇-0.5%磷酸(50∶50)，甲醇-0.5%磷酸(5∶95)，甲醇-水(10∶90)作为流动相进行筛选，比较其分离效果与基线平稳状态，结果确定甲醇-0.5%磷酸(5∶95)作为流动相。综上确定了供试品溶液的制备方法及流动相组成。采用二极管阵列检测器对检测波长进行选择，结果表

明，检测波长为274nm时，对照品有最大吸收波长。

经过比较，吉安新兴药材行(130801)含没食子酸量最大，其次是湖北(青春康源YA1000)，而河北与山东的平均含量基本一致。不同地域的差异，会导致药材所含的有效成分有一定的差异，因此，对临床用药时，选择药材的道地属性及质量的优劣具有一定的意义。本实验通过高效液相色谱法建立了柿蒂中没食子酸测定方法，并测定了四个产地10批次药材中没食子酸的含量，该含量测定方法准确、简便、灵敏、重复性好、精密度高；对用药来源的选择提供了一定的依据。

[1]肖培根主编.新编中药志(第二卷)[M].北京：化学工业出版社，2002：487.

[2]胡晓炜，宋绪峰.RP-HPLC法测定柿蒂中没食子酸的含量[J].中国药事，2003，17(6)：371.