马振华 邹春燕

幽门螺杆菌(HP)感染在慢性活动性胃炎、消化性溃疡及胃腺癌等各种胃肠道疾病中是一个至关重要的致病因素[1]。目前,我国是HP感染率及胃癌的发病率最高的国家[2]。根据cag致病岛的有无,将HP分为I型和II型,I型包含cag致病岛[3]。I型比II型更易诱导细胞形态的改变及更严重的炎症反应[4]。本研究利用I型和II型HP感染AGS细胞24 h,48 h,通过ELISA检测IL-17的浓度,进而讨论HP不同分型对IL-17的诱导作用及机制。

1 资料与方法

1.1 AGS细胞的培养 将AGS细胞(购买于中国科学院上海细胞研究所)接种至培养皿,加入RPMI1640培养基,放入37℃、5%CO2孵育箱培养。

1.2 HP的培养 在微需氧环境下,HP I型HP5K菌株、II型HP26695菌株(美国ATCC公司)用哥伦比亚血琼脂选择培养基培养。

1.3 HP不同菌株感染AGS细胞 HP I型HP5K菌株、II型HP26695菌株处于对数生长期时,分别取少许菌液涂片,用PBS溶液将处于对数生长期的HP I型HP5K菌株、II型HP26695菌株分别清洗2遍,5000转,离心5 min；分别制备HP悬液。

AGS细胞覆盖培养瓶底的80%时,弃掉原培养基,按细菌：细胞=100：1比例加入HP悬液,放入37℃、5%CO2孵育箱共同培养24 h、48 h。

1.4 ELISA

1.4.1 ELISA检测IL-17浓度 IL-17酶联免疫检测试剂盒购买自南京奥尼多福公司,取出上述不同菌株感染的AGS细胞,3000转,离心20 min。收集细胞上清,ELISA检测IL-17浓度。具体操作步骤严格按照说明书进行。

1.4.2 待测样品浓度的计算 以OD值为纵坐标,浓度为横坐标,做出标准曲线并求出曲线方程,然后根据待测样品的OD值在该曲线上求出相应的IL-17浓度,再乘以稀释倍数5倍,即待测样品的浓度。

1.5 统计学方法 实验数据用SPSS19.0统计软件分析,计量资料用均数±标准差(±s)表示,采用t检验,计数资料用率(%)表示,采用χ2检验,P＜0.05表示差异有统计学意义。……