潘雪 Thiruvengadam Arumugam Vijaya Ramachandran Craig D Logsdon

吉西他滨目前仍代表着胰腺癌化疗的标准传统方案。然而由于其内源耐药性导致其临床效用一般，因此一系列体外实验尝试检测吉西他滨耐药的分子指标。越来越多的证据显示，信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3, STAT3)在恶性肿瘤的转化中起着重要作用[1-3]。STAT蛋白是细胞内信号转导因子家庭的一员，转导细胞外信号，激活酪氨酸蛋白激酶(JAKs)和酪氨酸激酶受体，而它们又反过来进一步激活STATs。激活的STATs移位至细胞核,从而调节基因转录[4]。文献报道[5]，STAT3在白血病、淋巴瘤、乳腺癌和前列腺癌中表达，抑制STAT3活性可下调它的靶基因Bcl-XL、c-myc和cyclin D1等的表达，诱导肿瘤细胞凋亡。本研究应用RNA干扰技术沉默STAT3基因表达，探讨STAT3基因在胰腺癌细胞株对吉西他滨耐药机制中的作用。

材料和方法

一、材料

人胰腺癌细胞株BxPC3、L3.6pl、CFPAC-1、MPanc-96、PANC1和MiaPaCa-2均购自美国ATCC(American Type Culture Collection)，人胰腺癌上皮细胞(HPDE)由加拿大多伦多大学Tsao博士友情馈赠。除BxPC3在RPMI液中培养外，其他胰腺癌细胞株均在含10%胎牛血清的DMEM液中培养。HPDE细胞在含角质形成细胞的无血清培养液中培养。靶向STAT3的siRNA(siSTAT3)购自Dharmacon Res公司，阴性对照siRNA(siNC)购自Ambion公司。Hiperfect 转染试剂购自Qiagen公司。细胞增殖试剂盒购自Promega公司。

二、方法

1．STAT3活性检测：将癌细胞接种于96孔板，应用前期构建的STAT3荧光素慢病毒、对照的海肾萤光素酶慢病毒感染细胞[6]，获得稳定转染的带荧光素报告基因的胰腺癌细胞株。将感染细胞接种于96孔板，待细胞生长至70%融合后，收集细胞裂解液，应用双萤光报告基因试剂盒(Promega公司)定量检测STAT3及磷酸化STAT3(pSTAT3)的活性。……