硫氧还蛋白-2在急性坏死性胰腺炎大鼠肺的表达及意义

2014-08-04赵晖钟卫一韦惠琴黄滟添

中华胰腺病杂志 2014年6期

赵晖钟卫一韦惠琴黄滟添

硫氧还蛋白-2(thioredoxin-2, Trx-2)是存在于细胞线粒体的一种氧化还原蛋白，研究显示Trx-2在阻止线粒体氧化应激方面较Trx-1更具重要作用[1]。为此，本研究检测Trx-2在急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肺的表达，探讨Trx-2在对抗肺氧化应激方面的作用。

一、材料与方法

1．实验动物及分组：健康雄性SD大鼠48只,清洁级,体质量200～250 g，由广西医科大学实验动物中心提供。所有大鼠造模前禁食12 h，自由饮水。按完全随机法分成ANP组和对照组，每组各24只。采用腹腔注射6%左旋精氨酸(Sigma公司)25 ml/kg体质量、每次间隔1 h、共3次的方法制备ANP模型。对照组大鼠则腹腔注射等容积生理盐水。术后6 、12 、24 h分别处死8只大鼠，留取动脉血、胰腺和肺组织标本待测。

2．胰腺和肺组织病理学检查：胰腺和肺组织常规固定、石蜡包埋、切片及HE染色。光镜下观察大鼠胰腺病理改变,参考Kusske等[2]的标准进行评分。

3．血清谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)测定：GSH、MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所，按说明书操作。

4．Trx-2表达检测：采用Elivison二步法检测肺组织Trx-2表达。兔抗鼠多抗购自北京生物合成及生物技术公司，工作浓度1∶200；生物素化羊抗兔二抗来自即用型免疫组化Elivision plus广谱试剂盒。以PBS代替一抗作为阴性对照，用已知表达Trx-2的乳腺癌组织作为阳性对照。应用Leica图像分析系统进行定量灰度扫描，求出给定面积内的灰度值。染色愈深、灰度值愈小，则表示蛋白表达愈强。