曹维 周国雄 张海峰 丁晓凌 潘嵘嵘 瞿利帅 张弘 徐正府

自1974年Pour等采用N-亚硝基双-2-氧丙基(N-nitrosobis-2-oxopropylamin, BOP)成功诱导黄金仓鼠胰腺癌模型以来，各国学者已构建了多种胰腺癌动物模型，它们有其各自的优劣性，在临床科研应用中有不同用途[1-4]。由于仓鼠胰腺癌发病机制中K-ras基因点突变和5′CpG异常甲基化引起的p16灭活与人胰腺癌的发病机制相似，因此采用BOP制备的仓鼠胰腺癌模型是一个理想的动物模型。但研究发现，BOP诱导仓鼠肿瘤模型因诱导剂量和时间的差异而出现不同的结果[5]。为此，本研究采用不同时间、不同剂量BOP诱导仓鼠，观察其造模效果及对相关基因GAL-1、GAL-3、COX-2、5-LOX、MHC表达的影响。

材料与方法

一、实验动物和材料

叙利亚黄金仓鼠，6～8周龄，雌性，体质量80 g左右，由南通大学实验动物中心提供。人胰腺癌细胞株PANC1购自中国科学院上海生命科学研究院。BOP购自美国Santa Cruz Biotechnology公司，Trazol购自invitrogen公司，实时PCR试剂盒购自fermentas公司，抗COX-2、5-LOX、GAL-1、GAL-3、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ抗体均购自美国Santa Cruz公司。

二、仓鼠胰腺癌模型的构建

取72只仓鼠，按完全随机法分为A、B、C 组，每组24只。A组采用小剂量、长周期BOP造模，即皮下注射BOP 10 mg/kg体质量，每周1次，连续8周，36周成模后处死；B组采用大剂量、短周期BOP造模，即首次皮下注射BOP 70 mg/kg体质量，1周后皮下注射BOP 20 mg/kg体质量,每周1次，连续3周，20周成模后处死；C组为未注射BOP的对照组，饲养36周处死。取胰腺组织及肝脏组织行病理组织学检查。

三、COX-2、5-LOX、GAL-1、GAL-3、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ mRNA表达检测

采用实时PCR方法检测mRNA的表达。根据GeneBank数据库各基因全长cDNA序列，采用Primer 5.0软件设计引物，再经过Blast进行同源性检索后，由上海invitrogen公司合成引物，以β-actin为内参。……