薛爱国 李海燕 宋冬 丁伟

婴幼儿腹泻病原菌分布特点及药敏分析

薛爱国 李海燕 宋冬 丁伟

目的研究青岛市2013年儿童感染性腹泻的病原菌的分布、流行病学特征及对抗菌药物的敏感情况, 为临床预防以及合理用药提供参考依据。方法对2013年1月～2013年12月临床初步诊断为感染性腹泻患儿的新鲜粪便标本进行细菌分离培养和血清分型鉴定, 采用纸片扩散法进行药敏试验, 并以免疫层析双抗体夹心法定性检测A群轮状病毒抗原。结果526份粪便培养共检出病原菌6种80株, 检出率为15.2%(80/526)。检出沙门菌38株(47.5%), 志贺菌8株(10.0%), 致泻性大肠杆菌8株(10.0%), 金黄色葡萄球菌4株(5.0%), 铜绿假单胞菌19株(23.7%), 白假丝酵母菌3株(3.75%)。8株志贺菌7株为福氏志贺菌, 1株鲍氏志贺菌。沙门菌和志贺菌的耐药率分别为氨苄西林(68.7%、76.9%)、复方新诺明(21.1%、38.5%)、环丙沙星(15.8%、15.4%)、头孢曲松(6.25%、15.3%)。526份标本中A群轮状病毒阳性107份。结论2013年青岛市儿童细菌性腹泻的病原菌以沙门菌为主, 易感人群以2岁以下婴幼儿为主；而金黄色葡萄球菌感染以1岁以下婴儿为主；铜绿假单胞菌和白假丝酵母菌引起的腹泻主要是由于长期应用广谱抗生素使肠道菌群失调所导致；A群轮状病毒是引起婴幼儿秋冬季腹泻的主要病原。应规范临床用药, 加强细菌耐药监测。

儿童；感染性腹泻；病原学；耐药性；轮状病毒

儿童感染性腹泻是婴幼儿时期的常见病, 主要是由于婴幼儿时期消化系统发育还不完善, 并且机体的防御功能较差,该病对儿童的健康危害严重, 治疗不及时或不恰当可导致死亡, 故加强对其的防治具有重要意义。为明确青岛市儿童感染性腹泻的病原学分布特点及耐药性情况, 本研究对2013年青岛儿童医院肠道门诊就诊的急性感染性腹泻患儿粪便标本的细菌培养和药敏结果进行分析, 以期为临床的预防治疗提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 采集2013年1月～2013年12月本院肠道门诊中粪便常规镜检显示WBC≥10/HPF、RBC≥0/HPF, 临床初步诊断为急性腹泻病患儿的新鲜粪便标本526份, 置Carry-Blair运送培养基, 立即做细菌培养, 检测沙门菌、志贺菌、致泻性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等；同时做快速A群轮状病毒(RV)抗原检测。

1.2试剂来源 菌株鉴定使用法国梅里埃API鉴定试条；沙门菌、志贺菌、致泻性大肠杆菌诊断血清由宁波天润生物药业有限公司提供；药敏纸片使用英国Oxoid公司产品, 药敏培养基使用英国Oxoid生产的MH琼脂；标准菌株大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923作为质控菌株,由卫生部检验中心提供。A群RV抗原检测试剂盒由北京万泰生物药业股份有限公司提供。

1.3细菌分离鉴定及药敏试验 细菌培养按《全国临床检验操作规程》操作。粪便标本分别接种于血平板、麦康凯(MAC) 、SS平板(沙门菌和志贺菌琼脂平板)、35℃培养18～24 h后观察, 可疑菌落接种克氏双糖铁琼脂(KIA), 35℃培养过夜后, 进一步做血清分型鉴定。药敏试验使用纸片扩散法, 结果按临床实验室标准化委员会(CLSI)制订的标准进行判断。

1.4A群RV抗原检测 采用免疫层析双抗体夹心法(胶体金法)快速定性检测。

2 结果

2.1病原菌检出率及构成 526份粪便培养标本共检出病原菌6种80株, 检出率15.2%(80/526)。病原菌检出率及构成比见表1。

表180株腹泻病原菌检出率及构成比

2.238株沙门菌阳性检出率 检出非伤寒沙门菌O4群18株, 占沙门菌检出总株数的47.3%；沙门菌O9群17株, 占44.7%；O7群、O8群、O12群各1株, 占2.6%。

2.38株志贺菌阳性检出率 检出B群(福氏志贺菌)7株,鲍氏志贺菌1株。

2.4药敏结果 沙门菌和志贺菌的药敏结果见表2。

表2沙门菌和志贺菌的药敏情况

2.5A群RV感染 在526份临床初步诊断为感染性腹泻病患儿的粪便标本中, A群RV抗原检测阳性107份, 占20.3%。细菌培养阳性者另有铜绿假单胞菌19株, 金黄色葡萄球菌4株, 白假丝酵母菌3株。

3 讨论

小儿腹泻是一组由多病原、多因素引起的, 以腹泻为主要症状的疾病, 是婴幼儿时期的常见病。据文献报道, 每年至少350万5岁以下儿童因腹泻而死亡, 其中细菌性痢疾60万人［1］。本组调查中, 526份粪便标本检出病原菌6种80株,检出率为15.2%(80/526)。其中80株病原菌中, 非伤寒沙门菌38株, 占总阳性菌株的47.5%, 其中沙门菌O4群鼠伤寒沙门菌检出率最高, 共18株, 占沙门菌的47.4%。O9群共检出17株, 占沙门菌的44.7%, 另外还检出O7、O8和O12群3株非伤寒沙门菌, 提示2013年青岛市婴幼儿细菌性腹泻以沙门菌为主要病原菌, 其中以非伤寒沙门菌O4群鼠伤寒沙门菌为主要流行株。这一结果与近年来报道的非伤寒沙门菌的发病率有逐年上升趋势, 引起人类沙门菌感染的菌种亦逐年增多一致［2］。鼠伤寒沙门菌引起的小儿腹泻是小儿沙门菌感染中最常见者, 全年均有发生, 以6～9月发病率最高。绝大多数患儿为2岁以下的婴幼儿, ＜1岁者占1/2～1/3, 自然疫源广泛, 常由被污染的水, 牛奶和食物经口感染。本研究中志贺菌检出8株, 占总阳性菌株的1.52%, 其中痢疾志贺菌未检出, 福氏志贺菌检出7株, 鲍氏志贺菌1株。本组调查提示2013年青岛市细菌性腹泻中沙门菌的感染占绝对优势,而由志贺菌感染引起的腹泻较少见。福氏志贺菌共检出7株,而鲍氏志贺菌只有1株, 这与国内其他城市的报道不一致［3,4］。福氏志贺菌群侵袭力强, 对抗生素易产生耐药性, 流行菌型的不断变迁是腹泻病难以控制的原因之一, 菌型的变化趋势及规律值得关注。

本研究显示A群RV抗原检测阳性107份(107/526), A群轮状病毒是秋冬季小儿腹泻最常见的病原。本病多见于6～24个月的婴幼儿, ＞4岁者少见, 起病急, 常伴有发热和上呼吸道感染症状, 一般无明显中毒症状。患儿大便次数增多,大便呈水样或蛋花样, 无腥臭味。与细菌性腹泻症状明显不同。可作为临床鉴别诊断的依据。病毒致泻和细菌致泻的治疗方案也有所不同, 因此查明病原尤为重要, 这同时也提示大便常规检查已不能满足病原学变迁趋势的需求, 本院临床上近几年除明显的水样便和蛋花样便外, 其余含水分较多的黏液便或脓血便标本, 也已开始同时检测A群RV抗原, 特别是在RV流行季节已将RV抗原作为常规检查项目。

另外, 本研究中报道有铜绿假单胞菌19株, 金黄色葡萄球菌4株, 白假丝酵母菌3株。

此类患儿的腹泻多是由于长期应用广谱抗生素, 导致的肠道菌群失调, 使肠道内耐药的金黄色葡萄球菌, 绿脓杆菌,变形杆菌以及白色念珠菌等大量繁殖引起肠炎。停用抗生素后可很快痊愈。

由于抗菌药物的使用日益增多, 细菌耐药已成为世界性问题, 对人体健康的威胁越来越严重。沙门菌是公认的食源性疾病最常见的细菌, 食物是沙门菌的传染源［5］。本组的药敏结果表明, 志贺菌属对氨苄西林、复方新诺明的耐药率较高, 对头孢三代和亚胺培南, 哌拉西林/他唑巴坦的耐药率低。沙门菌对氨苄西林、复方新诺明、头孢三代和喹诺酮类药的耐药率均明显低于志贺菌属, 这与国外报道相同［6］,对亚胺培南, 厄他培南和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为0。目前认为志贺菌与沙门菌的耐药性主要是由耐药质粒所控制, 质粒介导耐药性使耐药菌株迅速扩散蔓延［7］, 导致对其防治困难, 因此细菌的高耐药率亟待解决。及时监测病原菌、遏制盲目滥用抗生素、加强用药的严谨性和科学性, 无疑是减少细菌多重耐药的方法。

［1］ Woodward DL, Rodgers BFG, PhD.Surveillance of antimicrobial resistance in salmonella, shigella and Vibrio cholerae in Latin America and the Caribbean: A collaborative project.Can J Infect D is, 2000, 11(4):181-186.

［2］ Su LH, Chiu CH.Salmonella: clinical importance and evolution of nomenclature.Chang Gung Med J, 2007, 30(3):210-219.

［3］ 谢永强, 邓秋连, 虢艳, 等.广州地区儿童感染性腹泻的病原学研究.中国当代儿科杂志, 2009, 11(2):107-109.

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［5］ 王茂起, 冉陆, 王竹天, 等.2001年中国食源性致病菌及其耐药性主动监测研究, 2004, 33(1):49-54.

［6］ Wybot I, Widelmauwe C, Godard C, et al.Antimicrobial drug resistance in nontyphoid human salmonella in Belgium: trends for the period 2000-2002.Acta Clin Belg, 2004, 59(3):152-160.

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Distribution characteristics of pathogens associated with infectious diarrhea in children from Qingdao district in 2012 and its sensitivity analysis

XUE Ai-guo, LI Hai-yan, SONG Dong, et al.
Department of Clinical Laboratory, Qingdao Women and Children Hospital, Qingdao 266012, China

ObjectiveTo investigate the distribution of pathogens causing infectious diarrhea in children from Qingdao district in 2013 and analyze epidemiological characteristics and corresponding drugsensitivity, in order to guide clinical prevention and treatment.MethodsPathogens were isolated and identified from fresh faeces of children preliminarily diagnosed with infectious diarrhea from January 2013 to December 2013.Drug-sensitivity testing was performed using paper disc diffusion method, and rotaviruses of A group were identified qualitatively with double antibody sandwich method to detect viral antigen.Results80 strains of pathogens belonging to six species were isolated from 526 samples of faeces with the detection rate of 15.2% (80／526), including 38 strains of Salmonella (47.5%), 8 strains of Shigella (10.0%), 8 strains of diarrheogenic Escherichia coli (10.0%), 4 strains of Staphylococcus aureus (5.0%), 19 strains of Pseudomonas aeruginosa (23.7%) and 3 strains of Candidid albicans (3.75%).7 strains of Shigella belonged to S.flexneri, 1 strain of Shigella belonged to S.boydii.Drug-sensitivity testing showed that for Salmonella and Shigella, the rates of drug resistance are as follows, to ampicillin, 60.5% and 87.5%, to SMZ-TMP, 21.1% and 37.5%, to Ciprofloxacin, 15.8% and 25%, to Ceftriaxone, 21.1% and 25%, respectively.A total of 107 samples were positive for rotavirus of group A.ConclusionThe main pathogens causing bacterial diarrhea in children from Qingdao distrinct in 2012 are Shigella, mainly infecting infants below two years old, while Staphylococcus aureus prefer to infect infants below one year old.And bacterial diarrhea caused by Pseudomonas aeruginosa and Candidid albicans are induced mostly by enteric dysbacteriosis owing to long-term use of broad-spectrum antibiotics.Rotavirus of group A is the most common pathogen causing diarrhea of infants in autumn and winter.Therefore, clinical usage of antibotics should be regulated towards standardization and drug resistance should be monitored regularly.

Children; Infectious diarrhea; Pathogens; Drug-resistance; Rotavirus

266012 青岛市妇女儿童医院检验科(薛爱国 丁伟),呼吸科( 李海燕), 中心注射室(宋冬)

丁伟