木日根吉雅 阿古拉

(1.北京中医药大学，北京 100029; 2.内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010110)

近年来，随着社会的迅速发展、生活节奏的加快、人口老龄化，使失眠的发病率急剧上升，其危害性将进一步显现［1］。现代医学采取的对症处理的治疗方法，多使用巴比妥类、苯二氮卓类以及非苯二氮卓类药物来调节失眠症。药物治疗在改善失眠症状的同时，往往伴有不同程度毒副作用，并且容易形成药物依赖，疗效也容易反弹，并非一种理想的治疗方法。所以寻找一种安全、有效、无副作用、不易产生药物依赖的治疗失眠的方法，有着重要的意义。蒙医文献记载与现代临床实验证明，蒙医温针疗法对失眠症的疗效显著，同时具有无毒副作用、安全可靠、简便易行等优点。本实验选取临床中最常选用的顶会穴、赫依穴、心穴等穴位，观察温针刺激上述穴位对失眠大鼠海马组织中谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)、乙酰胆碱(Ach)含量的影响，为临床治疗失眠选穴提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 实验动物: 健康雄性 清洁级SD 大鼠60 只，体重180～280g，由中国人民解放军军事医学科学院动物实验中心提供。许可证号: SCXK(军)2007 -004。

1.2 试剂及仪器: MLY -I 型蒙医疗术温针仪(特制银针，长2cm、直径0.5mm)，由内蒙古元阳中蒙医科技开发有限责任公司提供;BS124S 型电子d 平，购自北京赛多利斯d 平厂;YP1002N 型电子d 平，购自上海青海器械有限公司;HC-2018R 高速冷冻离心机，购自安徽中科中佳科学仪器有限公司;Prominence CBM -20A 高效液相色谱仪(日本岛津)，购自赛普瑞斯(北京)科技有限公司;对氯苯丙氨酸(PCPA)、Glu、GABA 、Ach、戊巴比妥钠等均购自Sigma 公司。地西泮注射液，购自西安利君制药有限责任公司。

1.3 造模方法［2］: 适应性饲养7d 后，第8d 开始每日上午8: 30 ～9: 00 腹腔注射PCPA(300mg/kg)制作失眠大鼠模型，连续2d。PCPA(对氯苯丙氨酸)用生理盐水(pH: 7 ～8)溶解，按lml/100g 配制成混悬液。在第一次腹腔注射PCPA 后28 ～30h，大鼠出现活动明显频繁，对外界的声、光等刺激异常敏感，兴奋性增高，攻击性增强，大便色灰白，昼夜节律紊乱，白天也活动不停等现象，表明造模成功。

1.4 分组安排: 将60 只SD 雄性大鼠随机分为4 组，即正常组、模型组、温针组和地西泮组，每组15 只大鼠。

正常组: 适应性饲养7d 后，第8d 开始每日上午8: 30～9: 00 腹腔注射生理盐水(0.lml/kg)，连续2d。每日定点喂食2 次，每次1 小时，不予其他刺激;

模型组: 适应性饲养7d 后，第8d 开始每日上午8: 30～9: 00 腹腔注射PCPA(300mg/kg)制作失眠大鼠模型，连续2d，但不给予其他刺激;

温针组: 适应性饲养7d 后，第8d 开始每日上午8: 30～9: 00 腹腔注射PCPA(300mg/kg)制作失眠大鼠模型，连续2d。第10d 开始在大鼠顶会穴、赫依穴和心穴［3］给予温针刺激，每次温针刺激15min(蒙医MY - I 型电热温针器)，加热温度为40℃左右(防止灼伤针刺部位)，每日治疗1 次，7d 为1 个疗程;

地西泮组: 适应性饲养7d 后，第8d 开始每日上午8: 30 ～9: 00 腹腔注射PCPA(300mg/kg)制作失眠大鼠模型，连续2d。第10d 开始大鼠腹腔注射地西泮注射液，0.92mg/kg/d，1 次/d，7d 为1 个疗程。

1.5 取材: 将4 组大鼠快速断头处死，冰上迅速取大脑海马称重，-80℃冰箱保存待测。

1.6 指标检测: 采用高效液相色谱加电化学(HPLC -ECD)方法测定谷氨酸(Glu)、γ -氨基丁酸(GABA)水平;采用高效液相-柱后衍生化-电化学检测器(HPLC -RE-ECD)方法测定乙酰胆碱(Ach)水平。

2 结 果

各组海马组织中Glu、GABA、ACh 含量的变化(见表1): 各组海马组织中Glu、GABA、ACh 含量检测结果显示。

表1 各组海马组织中Glu、GABA、ACh 含量的变化

与空白组比较，模型组大鼠海马中Glu 含量显著升高(P＜0.01)，GABA、ACh 含量均显著降低(P＜0.01);与模型组比较，温针组大鼠海马中Glu 含量显著降低(P＜0.01)，GABA、ACh 含量均升高(P＜0.05)，地西泮组大鼠海马中Glu 含量降低(P＜0.05)，GABA、ACh 含量均有所升高，但差异无统计学意义(P＞0.05);与温针组比较，地西泮组大鼠海马中Glu、GABA、ACh 含量差异均无统计学意义(P＞0.05)。

3 讨 论

从本研究来看，大鼠注射PCPA 造模后，海马组织中Glu 含量显著升高，GABA、ACh 含量均显著降低，这证明PCPA 促Glu，抑制GABA、ACh 分泌而使大鼠失眠。与模型组相比，温针组海马中Glu 含量明显降低，GABA、ACh 含量均升高。证明温针具有较好的调节海马中Glu、GABA、ACh含量的作用。与模型组比较，地西泮组海马中Glu 含量降低，但GABA、ACh 含量均无差异，证明地西泮对脑组织GABA、ACh 含量影响较弱。与地西泮组比较，温针组海马中Glu、GABA、ACh 含量均无差异，但温针组各指标含量更接近于空白组，可见温针治疗失眠的作用与地西泮相同或可能高于地西泮。

失眠症属蒙医“身、心、语”功能紊乱而引起人体“三根”平衡失调而形成的“赫依”病。是“三根”失衡，“赫依”偏盛而导致。因此蒙医治疗失眠症主要原则是抑制“赫依”、调节“三根”为主［4］。蒙医温针是集针刺效应、温热效应以及穴位特异性刺激为一体，通过对血液循环、神经系统、免疫功能等多系统、多渠道、多途径的复杂机制，达到调节机体、治疗疾病的目的［5］。通过温针作用于相应的穴位上具有很好的镇“赫依”，平衡“三根”的作用，从而达到治疗失眠的目的。

失眠与中枢神经系统兴奋性氨基酸与抑制性氨基酸神经 递质的平衡失调密切相关。GLU 是主要的兴奋性递质，对中枢 神经系统所有神经元均起兴奋作用，其释放的增加导致兴奋性 神经毒性，在失眠中起重要作用。GABA 由GLU 经谷氨酸脱羧酶 脱羧而成，是中枢神经系统中最主要的抑制性递质，具有神经 保护作用［6］。而乙酰胆碱(ACh)是中枢胆碱能系统中重要的神经递质之一，其主要功能是维持意识的清醒，在学习记忆中起重要作用［7］。蒙医温针可以明显降低失眠大鼠海马中Glu 含量和升高海马中GABA、ACh 含量，从而使大脑兴奋性降低。由此认为蒙医温针促睡眠机制与其可以调节失眠大鼠海马中Glu、GABA、ACh 含量密切相关，其促睡眠机制是否与其他中枢神经递质有关系有待进一步深入研究。

［1］周艳丽.针刺不同腧穴对失眠模型大鼠脑内神经递质5-HT、DA 影响的实验研究［J］. 中国中医基础医学杂志，2012，18(8): 887 -888.

［2］黎发根，李绍旦，杨明会，等. 和胃安神方对失眠大鼠脑组织谷氨酸与γ-氨基丁酸含量的影响［J］. 中国中医药信息杂志，2013，20(2): 50 -51.

［3］博·阿古拉. 蒙医传统疗术学［M］. 呼和浩特市: 内蒙古大学出版社，2011: 223 -243.

［4］策·苏荣扎布. 蒙医内科学［M］. 内蒙古人民出版社，2011: 30 -31.

［5］阿古拉，陈英松. 蒙医传统温针疗法对机体的生物效应［J］. 中国科技成果，2009，10(3): 19 -20.

［6］黎发根，李绍旦，杨明会等. 和胃安神方对失眠大鼠脑组织谷氨酸与γ-氨基丁酸含量的影响［J］.中国中医药信息杂志，2012，20(2): 50 -51.

［7］曾春萍.桃仁复苏汤对小鼠脑中乙酰胆碱含量、过氧化氢酶及谷胱甘肽过氧化酶活性的影响［J］. 现代中药研究与实践，2013，27(4): 30 -31.