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(甘肃农业大学食品科学与工程学院,甘肃兰州 730070)

蛋白质组学是指在高通量水平上研究蛋白质的特征,包括表达、翻译后的修饰、互作等内容。所涉及的技术包括蛋白质提取、分离、鉴定以及生物信息学分析等,其中蛋白质的提取是重要的过程[1]。由于水果组织中蛋白含量极低,加之富含蛋白酶及存在大量干扰物质,为后续的分析带来了诸多困难[2-3]。因此,选择适宜的水果蛋白质提取方法对开展蛋白质组学的研究就显得十分必要。目前,基于蛋白组学的水果蛋白质提取的方法均借鉴于其他植物材料,主要包括四种,分别是酚抽提法、SDS法、裂解液法以及三氯乙酸-丙酮法。本文对这些方法的特点及应用两方面进行了综述,旨在推荐适宜的提取方法,为水果蛋白组学的研究提供参考。

1 提取方法

1.1 酚抽提法

此法源于Hurkman[4]等人对植物细胞膜蛋白的提取。操作过程是取冷冻的组织,加入含有Tris-饱和酚和提取缓冲液(蔗糖,Tris-HCl,乙二胺四乙酸(EDTA),KCl,β-巯基乙醇,苯甲基磺酰氟(PMSF))研磨,离心取酚相,剩余液体用Tris-饱和酚继续提取、离心收集酚相,加入醋酸铵的丙酮溶液离心,再用醋酸铵的丙酮溶液、丙酮、乙醇分别洗涤沉淀,冷冻干燥沉淀后获得蛋白。由于该法可以有效地除去盐离子、酚类、糖类和色素等大量干扰物质,加之酚是强的蛋白变性剂,可以使蛋白质变性析出[5],因此可获得纯度较高的蛋白质,但该法操作过程较为繁琐。

酚抽提法现已广泛应用于水果蛋白质的提取[6]。……