杨 帆 王淑美林捷欣

(广东药学院，广州510006)

葛根总黄酮提取工艺的考察※

杨 帆 王淑美*林捷欣

(广东药学院，广州510006)

目的 筛选出从野葛根中提取葛根总黄酮的最佳工艺条件。方法 运用单因素考察以及正交试验法对葛根总黄酮的提取工艺条件进行优化；利用紫外分光光度计测量葛根总黄酮的含量；利用HPLC测量提取出的葛根素的含量；以测量得到的葛根总黄酮及葛根素的含量为评价指标，筛选出葛根总黄酮的最佳提取工艺。结果 以10倍量的70%乙醇提取3次，每次1.5h，为葛根总黄酮的最佳提取工艺条件。结论 该提取工艺成本低，重现性良好，适合于生产应用。

葛根；总黄酮；葛根素；提取工艺；中药

葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata或甘葛藤(粉葛)Pueraria thomsonii的干燥根，为临床常用中药，始载于《神农本草经》，具有解肌退热，生津止渴，透疹，升阳止泻，通经活络等作用，葛根的主要活性成分为异黄酮类化合物，如葛根素，大豆苷、大豆苷元等。现代药理研究表明，葛根提取物和葛根黄酮有防治糖尿病肾病发生发展的作用［1］，对心血管系统［2］、免疫系统［3］的疾病也有较好的治疗效果。

为了更好地发挥出葛根的药用功效，本实验采用单因素考察和正交设计法，以葛根总黄酮含量及葛根素的含量为检测指标，筛选出葛根总黄酮的最佳提取工艺。

1 实验材料

葛根，购自广州至信中药饮片有限公司，批号：121101，经鉴定为豆科植物野葛的干燥根。葛根素(中国药品生物制品鉴定所)。甲醇为色谱级，其余试剂均为分析纯。UV2450紫外-可见分光光度计(日本岛津公司)，RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，DK-S22恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司)。

2 方法与结果

2.1 葛根素对照品标准曲线的制备 精密称取葛根素对照品2mg，置于25ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，既得葛根素对照品储备液。分别精密吸取此储备液2、5、10、15、20、25、30μl注入高效液相色谱仪，按拟定的色谱条件测定，将峰面积与含量进行线性回归，得回归方程为：Y=3560690.32x+19719.16，r=0.99999，葛根素在0.164～2.460ug时呈良好的线性关系。

2.2 葛根总黄酮标准曲线的制备 精密称取葛根素对照品5.01mg，置于25ml容量瓶中，加30%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，既得葛根素对照品储备液。精密量取葛根素对照品储备液适量，分别配制浓度为0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.14g／ml的对照品溶液，以95%乙醇做参比溶液，在250nm处测定吸光度，以吸光度(A)为横坐标，质量浓度为纵坐标，得回归方程：Y=0.1634x+ 0.0034，r=0.9996，线性范围为0.02～0.14mg／ml。

2.3 单因素考察

2.3.1 不同溶剂浓度的考察 取干燥至恒重的葛根粉末10g (3份)，分别加入50%、70%、90%的乙醇，浸泡30min，加热回流提取2次，每次8倍量的醇溶液加热回流1h，过滤，合并2次所得滤液，用相应醇溶液定容到200ml，取样，测定葛根总黄酮及葛根素的含量，结果见图1，得70%的醇提取所得葛根总黄酮及葛根素的含量最大。

图1 不同溶剂浓度的考察图

2.4 正交实验设计 考虑到各因素之间的相互影响，为了获得最佳工艺条件，利用正交法“均衡分散”的特点。考虑影响乙醇回流提取的溶剂用量、提取时间、提取次数为这3个因素为考察因素，每个因素选择3个水平。以测得的回流提取样品中总黄酮含量葛根素含量为主要考察指标。根据单因素试验初筛选结果，选用L9(34)正交表设计实验，设计因素水平见表1所示。

表1 因素水平表

取干燥至恒重的葛根粉末10g(9份)，以70%的乙醇为提取溶剂。在平行操作条件下，按照L9(34)正交表安排，回流提取，提取液过滤，合并，浓缩后，用70%的乙醇定容到200ml容量瓶中，备用。正交实验结果及方差分析结果见下表，由表2可知，3个影响因素的影响从大到小依序为：提取次数、提取时间、溶剂用量。由表3可以看出，因素A、B、C对葛根总黄酮及葛根素的含量均有显著性影响，故最佳提取工艺为：A3B3C3，即10倍量的70%乙醇，加热回流提取3次，每次90min。由于正交表设计中没有出现最佳提取工艺，故增加验证性试验来对实验结果进行验证。

表2 L9（34）正交设计分析表（以葛根总黄酮含量为指标）(n，%)

表3 方差分析表（以葛根总黄酮含量为指标）

2.5 验证实验 为确保提取工艺的重现性及可行性，对最佳工艺A2B3C3进行3次验证试验，以葛根总黄酮及葛根素为考察指标，结果见表4，经测定，此工艺所得结果明显高于正交表中各数据，且重现性较好，提取工艺条件基本稳定。

表4 最优提取工艺验证试验(%)

3 结论

本实验通过单因素与正交试验相结合的方法，以葛根素和葛根总黄酮为指标，来筛选出葛根总黄酮的最优提取工艺，并对试验结果进行了统计学分析，使提取工艺更加科学合理，最大程度地降低了生产成本。最终确定出的最佳提取工艺条件是加10倍量的70%的乙醇，提取3次，每次90min。

［1］曾明，郑水庆，陶凯忠，等.葛根提取物对糖尿病大鼠肾脏功能的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2007，13(8)：44-46.

［2］张仁刚，刘福明.葛根的心血管药理作用研究进展［J］.中药材，2001，24(7)：70-72.

［3］白群华，李文明，刘洪涛，等.葛根素对脂多糖诱导N9小胶质细胞激活的抑制作用［J］.细胞与分子免疫学杂志，2010，26(3)：29-32.

Study on the Process for Extraction of Total Flavonoids from Radix of Pueraria

Yang Fan Wang Shumei✫Lin Jiexin
（guangdong Pharmaceutical University，guangzhou，guangdong，China 510006）

Objective In order to select the best process of extraction of the total flavonoids in Radix puerariae.Methods The extraction process of Radix Puerariae was studied by single factor and orthogonal design.Concentration of total flavonoids was measured by the UV spectrophotometer，and concentration of puerariae was measured by HPLC.The content of puerariae and the total flavonoids were used as indexes to evaluate the optimal extracting conditions.Results 60%alcohol as solvent，8 times of alcohol amount，3 times of extraction and 1hour per time.Conclusion The results indicates that this extraction process have a low cost and a good reproducibility，suitable for production applications.

Radix puerariae；Puerariae；Total flavonoids；Process for extraction；Chinese herbs

10.3969／j.issn.1672-2779.2014.03.101

1672-2779(2014)-03-0156-02

苏 玲 本文校对：梁生旺

2013-10-17)

国家自然科学基金项目［No：81073024，81274060］*通讯作者