李光喜 关琴笑 林捷欣 赵 路 王淑美

(广东药学院中药学院，广州510006)

通脉复方有效部位中葛根素的含量测定※

李光喜 关琴笑 林捷欣 赵 路 王淑美*

(广东药学院中药学院，广州510006)

目的 建立高效液相色谱法对通脉复方中葛根素含量测定的方法。方法 采用Diamonsil C18(250×4.6mm 5μm)色谱柱；流动相：甲醇-水(25∶75)；流速：1.0ml／min；检测波长：250nm；柱温：25℃。结果 葛根素在2.18～6.564μg范围内呈良好线性关系(r=0.9995)；平均回收率为99.54%，RSD为2.04%(n=6)。结论 该方法简便、准确、灵敏、重复性好，可用于通脉复方的质量控制。

葛根素；高效液相色谱；通脉；含量测定

通脉全方由丹参、川芎、葛根组成，具有活血通脉的功效，用于缺血性心脑血管疾病、动脉硬化、脑血栓、脑缺血、冠心病、心绞痛等疾病。方中葛根具有解肌退热、透疹、生津止渴、升阳止泻的作用。可用于治疗急性脑梗死和脑供血不足，其主要成分为葛根素［1-2］。本文采用高效液相色谱法对通脉有效部位中的葛根素进行了含量测定，从而控制通脉复方的质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-20AT高效液相色谱仪含二元梯度泵、CTO-20A柱温箱(日本岛津)，SPD-20A紫外-可见检测器，LCSOLUTION(VER.1.21)工作站；METTLER AE240电子分析天平(瑞士)；BSZZ4S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；6202小型高速粉碎机(北京环亚天元机械技术有限公司)；DK-S26型电热恒温水浴锅(上海精宏试验设备有限公司)。

1.2 试药 葛根素对照品(批号110752-200410)，购于中国药品生物制品检定所。甲醇(天津市四友生物医学技术有限公司，色谱纯)。其他试剂为分析纯。

1.3 药材来源 丹参、川芎、葛根药材均购自于广州致信药材有限公司，经广东药学院中药学院刘基柱教授鉴定丹参为唇形科植物丹参Salvi amiltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎；川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎；葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根。

2 方法与结果

2.1 色谱条件［3］色谱柱：Diamonsil C18(250× 4.6mm 5μm)色谱柱；流动相：甲醇-水(25∶75)；流速：1.0ml／min；检测波长：250nm；柱温：25℃。

2.2 葛根素对照品溶液的制备 精密称取葛根素对照品10.67mg，置25ml量瓶中，加入30%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取2ml，置10ml量瓶中，加30%乙醇至刻度，摇匀，即得葛根素浓度为0.0854mg·ml-1的对照品溶液。

2.3 有效部位的制备 丹参醇提后药渣、川芎提挥发油后药渣、葛根药材按处方比例混匀，8倍药材量50%乙醇浸泡30分钟，回流提取2次，每次1小时。过滤，合并两次提取液，用旋转蒸发仪减压回收溶剂至无醇味，加蒸馏水分散为浓度110mg·ml-1(生药量)上样，树脂柱的径高比为1∶10，上样量与树脂体积比为1∶2.8，静置吸附3小时，以2倍树脂体积的蒸馏水清洗后，用50%的乙醇洗脱，洗脱剂用量为6倍量树脂体积。加压回收洗脱剂，低温干燥，即得。

2.4 供试品溶液的制备 称取有效部位样品0.05g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.5 阴性样品溶液的制备 称取丹参、川芎药材适量按有效部位制备工艺制得缺葛根药材的阴性样品混合均匀，按供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。分别吸取供试品溶液、阴性对照溶液、对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，按2.1项下的色谱条件进行测定。记录其HPLC液相色谱图，结果表明通脉有效部位中葛根素色谱峰分离良好且阴性样品溶液无干扰。结果见图1～图3。

图1 葛根素对照品色谱图

图2 有效部位供试品色谱图

图3 阴性样品溶液的色谱图

2.6 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液依次配制成浓度为0.109μg／μl、0.1663μg／μl、0.82188μg／μl、0.2735μg／μl、0.3282μg／μl的溶液，分别精密吸取20μl，注入液相色谱仪，测定峰面积。以色谱峰峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标绘制标准曲线，并进行线性回归，得回归方程为：y=3E+06x+1E+06(r= 0.9995)。结果表明葛根素在2.18μg～6.564μg范围内呈良好的线性关系。

2.7 精密度考察 精密吸取同一对照品溶液20μl注入高效液相色谱仪，按2.1项下色谱条件连续测定5次，测得峰面积。结果显示，RSD=1.49%，该方法的精密度良好。

2.8 重复性考察 取同一批有效部位样品5份，每份约50mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，按2.4项下供试品溶液的处理方法处理，精密吸取供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，按2.1项下的色谱条件，记录峰面积，并计算葛根素的含量，结果表明，RSD=1.03%，该方法的重复性良好。

2.9 稳定性考察 精密吸取同一供试品溶液20μl，分别在制备后0h、1h、3h、6h、8h、12h注入高效液相色谱仪，按2.1项下的色谱条件，记录峰面积。结果显示，RSD=1.41%，供试品溶液在12h内稳定性良好。

2.10 加样回收率试验 取已知含量的样品约0.011g，共6份，精密称定，分别精密加入浓度为0.4268mg· ml-1的葛根素对照品溶液3ml置锥形瓶中，按照2.4项下供试品溶液制备方法制备。按2.1项下色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验测定结果(%)

结果表明，葛根素的平均加样回收率为99.54%，RSD为2.04%，符合定量分析的要求。

2.11 样品的含量测定 取3批号的有效部位样品各5份，每份约0.05g，精密称定，按2.4项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，计算供试品的含量。结果见表2。

表2 样品葛根素的含量测定结果(%)

3 讨论

三批样品中葛根数的含量测定结果及方法学考察结果表明，所建立的高效液相色谱法操作简便、精密度和重现性良好、回收率合格、测定结果准确，可作为通脉有效部位中葛根素的质量控制方法。

［1］彭家先，曹观新.葛根素治疗急性缺血性脑梗塞28例［J］.湖北民族学院学报(医学版)，2008，25(3)：66-67.

［2］王利亚，陶宏韬.葛根素治疗急性脑梗塞60例［J］.哈尔滨医药，2003，23(6)：8-9.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［S］.2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：312-313.

Determination on content of puerarin in the effective fraction of Tongmai Decoction

Li guangxig uan Qinxiao Lin Jiexin Zhao Lu Wang Shumei✫
（Chinese medicinal herb college guangdong pharmaceutical university，guangzhou，510006，China）

Objective To establish the HPLC method for the content determination of puerarin in Tongmai Decoction.Methods The HPLC was applied with Diamonsil C18(250×4.6mm 5μm)column by methanol-water(25∶75)as the mobile phase the flow rate was 1.0ml／min.The column temperature was 25℃and the detection wavelength was 250nm.Results The linear range of Puerarin was 2.18～6.564μg(r=0.9995) with an average recovery of 99.54%(RSD=2.04%n=6).Conclusion The method is sample accurate sensitive and reproducible it can use to control the quality of Tongmai.

Puerarin；HPLC；Tongmai Decoction；Content determination

10.3969／j.issn.1672-2779.2014.03.097

1672-2779(2014)-03-0149-02

苏 玲 本文校对：梁生旺

2013-10-20)

国家自然科学基金项目［No：81073024］；广东省中医药局基金项目［No：20112152］

*通讯作者