膨化饲料中四种菜籽饼粕对草鱼鱼体氨基酸组成的影响

2014-01-21金素雅叶元土蔡春芳肖顺应王永玲

饲料工业 2014年8期

■金素雅叶元土蔡春芳肖顺应王永玲

（1.苏州大学基础医学与生物科学学院，江苏省水产动物营养重点实验室，江苏苏州215123；2.温州市龙湾区渔业技术推广站，浙江温州325000）

菜籽饼粕是重要的水产饲料蛋白质饲料资源之一，与其他油料饼粕相比，蛋白质中蛋氨酸、半胱氨酸等含硫氨基酸含量较高，赖氨酸略低于豆粕，但蛋白效价为 3.0～3.5，比豆粕还高。菜籽饼粕在膨化饲料中是否会对草鱼鱼体的氨基酸组成产生影响，鱼体氨基酸组成与饲料氨基酸组成有何关系等之类的问题还少有报道。本文研究4种菜籽饼粕的膨化饲料对草鱼全鱼、肌肉、肝胰脏的氨基酸组成的影响，并分析其氨基酸组成与对应饲料的相关性，为水产养殖中合理有效地使用菜籽饼粕提供基础资料。

1 材料及方法

1.1 试验鱼

试验草鱼为苏州市相城特种水产养殖场培育的一龄鱼种，初重（39.4±2.9）g。经两周暂养后，挑选体格健壮、规格整齐的鱼种随机分养于24个养殖网箱中，每组分养15尾，每组3个平行。

1.2 试验饲料

试验饲料由小麦、细米糠、米糠粕、豆粕、鱼粉、棉籽粕、菜籽饼粕等常规原料组成。试验所选4种菜粕分别为国产菜粕、加拿大菜粕、冷生榨菜饼、印度菜粕，其特性及营养成分见表1，氨基酸组成见表2。4种菜籽饼粕分别设计23.0%、34.5%二个添加水平，分别命名为国产菜粕膨化Ⅰ组（国菜膨化Ⅰ组，GEⅠ组）、国产菜粕膨化Ⅱ组（国菜膨化Ⅱ组，GEⅡ组）、加拿大菜粕膨化Ⅰ组（加菜膨化Ⅰ组，JEⅠ组）、加拿大菜粕膨化Ⅱ组（加菜膨化Ⅱ组，JEⅡ组）、冷生榨菜饼膨化Ⅰ组（生饼膨化Ⅰ组，SEⅠ组）、冷生榨菜饼膨化Ⅱ组（生饼膨化Ⅱ组，SEⅡ组）、印度菜粕膨化Ⅰ组（印菜膨化Ⅰ组，YEⅠ组）、印度菜粕膨化Ⅱ组（印菜膨化Ⅱ组，YEⅡ组）共8个试验组，以棉粕用量平衡试验饲料蛋白质水平。所有饲料原料经粉碎过60目筛，混合均匀，用LHD超越牌饲料膨化机加工成直径2 mm的膨化饲料，饲料置于-20℃冰箱储存备用。各试验组试验饲料组成及营养水平见表3，氨基酸组成见表4。

表1 4种菜籽饼粕的特性及营养成分(干物质基础)

表2 4种菜籽饼粕氨基酸组成(干物质基础，g/100 g)

1.3 饲养管理

养殖试验在室内长为6 m、宽为3 m、水深1.2 m的水泥池中进行，每个水泥池挂5个网箱（1.5 m×1 m×1 m），每个试验组设3个重复，共24个网箱。养殖水体为池塘水经过曝气后抽入，每周换水1次，换水量不超过1/3。每个水泥池加充氧头10个，保证水体连续不断的充氧。养殖时间为9月25～11月25日，正式试验共62 d。

在整个养殖试验期间，水温22～28℃、溶氧＞6.0 mg/l、pH值为(7.4±0.3)、氨态氮＜0.1 mg/l、亚硝酸盐＜0.01 mg/l、硫化物＜0.05 mg/l。试验期间每天投喂量为鱼体重的3%～5%，每隔1～2周根据摄食情况调整投饲量，每天分3次投喂（08:00、12:30、17:00）。

1.4 测定指标与方法

1.4.1 测定指标

测定饲料、全鱼、肌肉、肝胰脏干样的17种蛋白氨基酸及血清、肌肉、全鱼的游离氨基酸，并分析全鱼、肌肉、肝胰脏氨基酸与原料、饲料氨基酸之间的相关性。

1.4.2 测定方法

称取适量全鱼、肌肉、肝胰脏干样 (含蛋白 7.5～25 mg，准确至 0.1 mg)于 20 ml安瓿瓶中，加 6 mol/l盐酸 10 ml后液氮冷冻，真空封口，置于(110±1)℃烘箱中水解 22～24 h。水解完成后，取出冷却至室温，混匀、开管、过滤，取0.5 ml滤液置于试管内。将试管放置真空干燥箱中，低于60℃真空蒸干。蒸干后，加入3～5 ml样品稀释液到试管，使氨基酸浓度达到50～250 nmol/ml，振荡混匀，0.22 μm 滤膜过滤后，用S-433D氨基酸分析仪（德国SYKAM公司）测定蛋白质氨基酸含量。色氨酸因酸水解破坏没有单独测定。

表3 试验饲料组成及营养水平(干物质基础)

表4 试验饲料氨基酸组成(干物质基础)

取适量离心后的血清，加入等量磺基水杨酸（8%），混合摇匀后置于4℃的冰箱中存放30 min以上除蛋白，取出后12 000 r/min离心20 min，取上清液，用锂盐的样品稀释液按1∶1将其溶解，用0.22 μm滤膜过滤后上机。

准确称取一定量的肌肉、全鱼鲜样样品，加入10倍体积的3%磺基水杨酸后匀浆，12 000 r/m、4℃离心20 min，取上清液用0.22 μm的微孔滤膜过滤后上机。

用S-433D氨基酸分析仪（德国SYKAM公司）测定游离氨基酸含量。

1.5 数据处理与分析

试验结果用Excel与SPSS 17.0软件进行统计分析，采用“平均值±标准差”表示，在双因素方差分析的基础上，采用Duncan's多重比较法检验组间差异，以P＜0.05表示差异显著。相关系数的处理方法采用Microsoft Office(2003)中的 Excel表中“CORREL”函数计算。

2 结果与分析

2.1 不同菜籽饼粕对草鱼全鱼氨基酸组成的影响(见表5)

表5 不同菜籽饼粕及其添加水平对全鱼氨基酸组成的影响（干物质基础）

由表5可知，各试验组的全鱼氨基酸组成与对应饲料的氨基酸组成相关系数无明显差异，除GEⅠ组的相关系数为0.88外，其他的均在0.90以上；与原料氨基酸组成的相关系数在0.90～0.95之间，并无明显差异。各试验组全鱼的必需氨基酸总量的变异系数为11.71%，氨基酸总量的变异系数为12.17%。各必需氨基酸中蛋氨酸的变异系数最大，达到16.47%，其他必需氨基酸变异系数在10.02%～13.60%之间。非必需氨基酸中脯氨酸变异系数最大为15.57%，其他非必需氨基酸变异系数在12.30%～15.49%之间。

以上结果表明，4种菜籽饼粕没有显著影响草鱼全鱼的氨基酸组成。

2.2 不同菜籽饼粕对草鱼肌肉氨基酸组成的影响（见表6)

由表6可知，草鱼肌肉的氨基酸组成与对应饲料的相关系数各试验组间无差异，都在0.87以上；与对应的原料的氨基酸组成的相关系数在0.85～0.92之间，变异系数为2.12%；肌肉的必需氨基酸变异系数为3.52%，氨基酸总量的变异系数为3.73%。各试验组必需氨基酸的变异系数在2.68%～6.75%之间，其中组氨酸的变异系数最高；非必需氨基酸的变异系数均在5.66%以内。

以上结果表明，4种菜籽饼粕没有显著影响草鱼肌肉的氨基酸组成。

2.3 不同菜籽饼粕对草鱼肝胰脏氨基酸组成的影响（见表7）

由表7可知，草鱼肝胰脏的氨基酸组成与对应饲料的相关系数各试验组间无差异，都在0.88～0.91之间，变异系数为1.01%；与原料氨基酸组成的相关系数在0.87～0.91之间，变异系数为1.76%，各试验组并无明显差异。各试验组必需氨基酸的变异系数在8.70%～15.75%之间，其中蛋氨酸的变异系数最高，达15.75%；非必需氨基酸的变异系数最高的是脯氨酸，其值为13.73%。肝胰脏的必需氨基酸变异系数为9.84%，氨基酸总量的变异系数为9.98%。

表6 不同菜籽饼粕及其添加水平对草鱼肌肉氨基酸组成的影响（干物质基础）

表7 不同菜籽饼粕及其添加水平对草鱼肝胰脏氨基酸组成的影响（干物质基础）

以上结果表明，4种菜籽饼粕没有显著影响草鱼全鱼肝胰脏的氨基酸组成。

2.4 不同菜籽饼粕对草鱼血清游离氨基酸组成及含量的影响（见表8）

由表8可知，各试验组草鱼的血清游离氨基酸组成与对应饲料的氨基酸组成相关系数均成负相关，其变异系数为14.34%。各试验组血清游离氨基酸的必需氨基酸总量的变异系数为3.92%，其中苯丙氨酸的变异系数最大，达到12.39%；氨基酸总量的变异系数为4.41%，各氨基酸变异系数在4.12%～16.36%之间。各试验组之间的血清游离氨基酸的相关系数在0.974～0.995之间，表明各试验组草鱼的血清游离氨基酸组成接近。

表8 不同菜籽饼粕及其添加水平对草鱼血清游离氨基酸组成及含量的影响

以上结果显示：①各试验组草鱼的血清游离氨基酸组成与对应饲料的氨基酸组成的相关性不强。②依据血清游离氨基酸的含量，计算各试验组之间血清游离氨基酸整体的相关系数，结果均在0.974以上(见表8)，表明不同试验组之间血清氨基酸组成模式基本一致，处于相对稳定的状态。

2.5 不同菜籽饼粕及其添加水平对草鱼肌肉游离氨基酸组成及含量的影响（见表9）

由表9可知，各试验组的肌肉游离氨基酸组成与对应饲料的氨基酸组成相关系数均成负相关，其变异系数为15.03%。各试验组肌肉游离氨基酸的必需氨基酸总量的变异系数为2.8%，其中蛋氨酸的变异系数最大，达到18.6%；氨基酸总量的变异系数为1.7%，各氨基酸变异系数在2.6%～18.6%之间。各试验组之间的肌肉游离氨基酸的相关系数在0.993～0.999之间，表明各试验组间草鱼的肌肉游离氨基酸组成接近。

表9 不同菜籽饼粕及其添加水平对草鱼肌肉游离氨基酸组成及含量的影响

以上结果显示：①各试验组草鱼的肌肉游离氨基酸组成与对应饲料的氨基酸组成的相关性不强。②依据肌肉游离氨基酸的含量，计算各试验组之间肌肉游离氨基酸整体的相关系数，结果均在0.993以上(见表9)，表明不同试验组之间肌肉氨基酸组成模式基本一致，处于相对稳定的状态。

2.6 不同菜籽饼粕及其添加水平对草鱼全鱼游离氨基酸组成及含量的影响（见表10）

由表10可知，各试验组的草鱼全鱼游离氨基酸组成与对应饲料的氨基酸组成相关系数在0.332～0.450之间，变异系数为9.03%。各试验组的全鱼游离氨基酸的必需氨基酸总量的变异系数为1.3%，变异系数最大的是蛋氨酸，达6.5%；氨基酸总量的变异系数为2.2%，各氨基酸的变异系数在2.0%～20.4%之间。各试验组之间的全鱼游离氨基酸的相关系数在0.989～0.997之间，表明各试验组草鱼的全鱼游离氨基酸组成接近。

以上结果显示：①各试验组草鱼的全鱼游离氨基酸组成与对应饲料的氨基酸组成的相关性不强。②依据全鱼游离氨基酸的含量，计算各试验组之间全鱼游离氨基酸整体的相关系数，结果均在0.989以上(见表10)，表明不同试验组之间的全鱼氨基酸组成模式基本一致，处于相对稳定的状态。

3 讨论

鱼虾对蛋白质的需要量实际是对必需氨基酸和非必需氨基酸混合比例数量的需要。鱼类必需氨基酸有10种，它们的总含量应不低于饲料中粗蛋白含量的1/3，而动物性蛋白含量应不低于饲料蛋白质含量的1/3，在鱼类的日粮中必需氨基酸与非必需氨基酸之间的比例大致是40%∶60%。本试验所用饲料的∑EAA/pr值在0.33～0.38之间，其必需氨基酸和非必需氨基酸之间的比例大约为45%∶55%，符合鱼体对蛋白的需求。叶元土等认为饲料氨基酸的平衡效果对草鱼的养殖效果有密切影响，其影响规律成正相关关系。本试验结果表明各试验饲料与其相对应的试验组的全鱼、肌肉、肝胰脏相关系数均在0.87～0.95之间，并无显著差异，表明各试验组的氨基酸含量均能满足草鱼的生长需要。

表10 不同菜籽饼粕及其添加水平对草鱼全鱼游离氨基酸组成及含量的影响

各试验组草鱼肌肉的各种必需氨基酸的变异系数在2.68%～6.75%之间，说明各试验组肌肉的必需氨基酸组成非常接近，并且与饲料的必需氨基酸相关性不显著（P＞0.05），这表明试验饲料对肌肉的必需氨基酸组成没有影响。这一结果与黄更生等[6]研究结果相同。Kaushi饲喂不同试验饲料的大菱鲆全鱼必需氨基酸组成没有显著性差异；Mambrini、Akiyama推断全鱼必需氨基酸的稳定性可以延用到大部分的硬骨鱼类上。Mai等研究表明大黄鱼肌肉其它必需氨基酸不受饲料中蛋氨酸的影响，蛋氨酸和异亮氨酸含量受饲料中蛋氨酸水平的影响。林仕梅等发现补充D-蛋氨酸对罗非鱼全鱼氨基酸含量不产生任何影响，但鱼体组氨酸和脯氨酸含量受饲料中蛋氨酸水平的影响。本试验结果表明试验中的饲料氨基酸组成对草鱼全鱼、肌肉、肝胰脏氨基酸组成没有明显影响。

施瑔芳认为，饲料中的蛋白质在鱼体内经过消化转变为各种氨基酸，由肠壁吸收后进入鱼体的血液，其中一部分经肝门静脉进入肝脏；另一部分氨基酸随血液循环分布到鱼体内各组织细胞中，用来合成鱼体自身的特殊蛋白质或各种活性物质，血液中的游离氨基酸是鱼体肌肉组织中游离氨基酸和蛋白质的主要来源。不同器官组织游离氨基酸的组成和来源有差异，不同组织蛋白质周转代谢存在差异。罗莉等研究表明，对草鱼饲喂不同氨基酸模式的日粮发现，氨基酸模式越平衡，蛋白质合成和降解速率越高，蛋白质合成的增加更占优势。本试验结果表明，各试验组草鱼的血清、肌肉、全鱼游离氨基酸组成与对应饲料的氨基酸组成的相关性均不强，但不同试验组之间的草鱼同一器官组织的游离氨基酸组成的相关系数均在0.9以上。