王颖航，刘君亮，叶豆丹，高 阳，徐多多，潘 志#(1.长春中医药大学第一附属医院风湿免疫科，长春 13001;.长春中医药大学研发中心，长春 130117)

肾纤维化(包括肾小球硬化和小管间质纤维化)，以过量细胞外基质(ECM)在肾间质积聚、肾脏组织结构破坏及功能丧失为主要特征，是决定多种肾脏疾病发展和预后的重要因素，肾小管上皮细胞转分化为肾间质纤维化发生的重要机制［1-3］，研究表明，在异常生理状态下，肾小管上皮细胞可发生结构和功能损伤，分泌多种炎症因子和细胞因子，通过表型转化为肌成纤维细胞，随后进入间质异常的合成细胞外基质。本实验研究了红景天苷对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HKC)的表型转分化的作用。

1 材料

HKC株(购自上海榕柏生物技术有限公司);红景天苷(购自吉林省食品药品检验所);DMEM/F12(1∶1)细胞培养基(美国Gibco公司生产);人重组TGF-β1(美国R＆D System公司生产);胎牛血清(美国HyClone公司生产);人ColⅠ型、ColⅢ型胶原酶联免疫(ELISA)试剂盒(美国RB公司生产)。

2 方法

2.1 HKC细胞培养

在含10%胎牛血清、DMEM/F12、青霉素及链霉素培养液中培养HKC细胞，于37℃、5%CO2培养箱中培养，0.25%胰蛋白酶消化细胞进行细胞传代。每隔2～3 d换新鲜培养基1次，培养融合至80%以上开始实验。进行实验前先用无血清培养基培养24 h使细胞同步化，采用TGF-β1及不同浓度红景天苷刺激细胞，收集细胞和培养液分别进行实验，实验重复3次。

2.2 实验分组

传代培养的 HKC细胞分为 5组:(1)空白对照组:DMEM/F12培养液;(2)TGF-β1诱导组:DMEM/F12培养液+10 ng/ml TGF-β1;(3)受试 1组:DMEM/F12培养液 +10 ng/ml TGF-β1+12.5 μM 红景天苷;(4)受试 2 组:DMEM/F12培养液+10 ng/ml TGF-β1+25 μM红景天苷;(5)受试3组:DMEM/F12培养液 +10 ng/ml TGF-β1+50 μM 红景天苷。……