王 洁，李利平，王卫萍，李晓军

(本文编辑:张仲书; 英文编辑:王建东)

目前已证明，90%以上的急性上呼吸道疾病和大部分的下呼吸道疾病是由细菌以外的病原体引起，其中以呼吸道病毒最常见［1-2］，包括流感病毒A(FluA)、流感病毒 B(FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)A型、B型以及副流感病毒1型、3型等。近年来，新发呼吸道传染病如SARS、禽流感等疾病的爆发，给人类社会和国民经济带来很大负担［3］。由于这些病毒引起的感染症状和流行特点相似，仅靠临床症状及常规检测方法进行病原的确定非常不可靠［4］，因此迫切需要一种高灵敏度和特异性的方法可以同时准确地鉴别诊断和快速识别病原体，对预防疾病的传播和患者的诊断治疗至关重要。

本研究将靶序列富集多重-聚合酶链反应(target enriched multiplex PCR，Tem-PCR)和 Luminex液相芯片(multiple analytes profiling，xMAP)技术有机结合，克服了病毒分离培养、血清学诊断及单一PCR的缺点，可以在单个反应体系中检测出4种常见病毒引起的呼吸道感染。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器 pCR○RⅡ载体、脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)及脱氧核糖核酸酶I(DnaseⅠ)等购自上海Invotrizen公司，质粒小量提取试剂盒(QIAprep Spin Miniprep Kit)和 cDNA第一链合成试剂盒(Quantscipt RT Kit)购自德国QIAGEN公司，Wizard SV凝胶及PCR纯化系统(Wizard SV Gel and PCR Clean-up System)、ApaⅠ限制性内切酶、SP6 RNA 聚合酶及 rNTP购自 Promega公司，Trans Start TM TaqDNA聚合酶购自北京全式金生物技术公司，RNA磁珠柱提取试剂盒购自上海之江生物科技有限公司，PCR仪购自美国ABI公司，Luminex Liquidchip 200系统及配套耗材购自上海透景生命科技有限公司。

1.2 引物和探针序列的设计及合成 从NCBI下载病毒的靶标核酸序列，利用Primer Premier 5.0软件分析并设计位……