石亮程，贺 骏，何 玲，王 伟 (湖南省长沙市妇幼保健院，湖南 长沙 410007)

子宫颈癌是常见的妇科生殖系统肿瘤之一，其病死率仅次于乳腺癌。而子宫颈癌是目前癌症中唯一病因明确的癌症，HPV确认为引发子宫颈癌的根本性致病因子。笔者于2008年11月～2012年11月对13 542例妇女进行HPV感染的检测，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料:选择2008年11月～2012年11月在我院门诊或住院的女性患者共计13 542例，年龄最小15岁，最大85 岁，平均(32.5 ±9.25)岁。

1.2 仪器与试剂:仪器选择博日PCR扩增仪和德国Biometra PCR扩增仪，HPV检测系统(潮州凯普，含HPV－DNA提取试剂盒、HPV－DNA扩增试剂盒、医用快速杂交仪、HPV检测试剂盒)

1.3 采集和处理:由临床专科医师进行采取:暴露宫颈，用棉拭子擦去宫颈口多余分泌物，用取样刷置于宫颈口顺时针方向旋转5～6周以获取足量的宫颈脱落上皮细胞。将取样后的宫颈刷放入含有细胞脱洗保存液专用采集管中，于3 d内进行检测。DNA的提取:将宫颈细胞保存液充分震荡混匀，取500 μl保存液于高温灭菌处理1.5 ml离心管中以14 000 r/min离心5 min，弃上清液;加入Ⅰ液400 μl，充分混匀，100℃金属浴15 min后，加入提取液Ⅱ400 μl，充分混匀，14 000 r/min 离心 5 min，去上清;再14 000 r/min离心2 min，完全除去残余的上清液，打开盖子5～10 min，以让Ⅱ液充分挥发，加入 Ⅲ液60 μl充分混匀.加上清1 μl于已分装扩增试剂的扩增管中(扩增管内为22.75 mix液加 0.75 Taqman)。

DNA的扩增:95℃预变性9 min;95℃20 s→55℃30 s→72℃30 s共40个循环，72℃延伸5 min。

DNA的杂交:将杂交膜封好后调节杂交仪温度到45℃，加入已45℃预温杂交液 800 μl预杂交2 min，排尽，加入已45℃温浴杂交液500 μl，将扩增产物100℃金属浴5 min后于冰水浴中2 min，将其全部加入对应的杂交液中……