郭芝刚，曾 军，张锦宏，何玉文△

（广州医学院：1.基础学院；2.第一附属医院药剂科 510120）

研究表明，吲哚胺－吡咯2，3－双加氧酶（indoleamine－pyrrole 2，3－dioxygenase，IDO）在肿瘤逃避免疫监视、肿瘤发生、发展中起着重要作用［1－2］。多种人肿瘤细胞和原发性肿瘤组织表达IDO，其抑制抗原特异性T淋巴细胞的增生，使肿瘤逃避机体的免疫攻击［3－4］。研究发现，抑制IDO表达可以抑制自发性肿瘤的生长［5］，丁酸钠（sodium butyrate，NaB）也能抑制IDO的表达，但机制不明确。本研究主要探讨NaB抑制鼻咽癌细胞CNE2内IDO表达的分子机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株 CNE2细胞株为人鼻咽癌上皮细胞，由中山大学肿瘤医院基础部赠送。

1.1.2 试剂 试剂Soudim butyrade，购自Sigma公司；注射用重组人干扰素γ（IFN－γ），海雷泰，国药准字S19990059；兔抗IDO抗体（中山大学微生物与生化制药研究室制作）；β－肌动蛋白抗体（β－actin）购自北京博奥森生物技术有限公司；辣根过氧化物酶（HPR）标记的羊抗兔IgG购自Promega公司；SYBR Green PCR检测试剂盒购自Toyobo公司；RPMI－1640培养基粉末购自美国Gibco公司；新生牛血清购自北京晨曦勇创公司。

1.2 细胞培养 CNE2细胞用含10%新生牛血清的RPMI－1640培养基，37℃，5%CO2条件下培养，以每孔3×105个接种6孔板，待细胞覆盖率达60%～70%，加入NaB和（或）IFN－γ处理细胞。

1.3 Western blot免疫印迹检测IDO的表达 取上述培养的细胞，加入2mmol／L NaB处理CNE2细胞0、6、12、24h后，加入100U／mL IFN－γ刺激24h后裂解细胞，进行蛋白定量，每孔20μg蛋白上样，120V电压进行10%SDS－PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，在100V，90min的条件下电转，5%脱脂奶粉（TBST配制）封闭1.5h后，IDO抗体按1∶1 000的比例与封闭液混合，4℃过夜孵育电转膜，TBST洗涤3次后，加入HPR标记的羊抗兔IgG二抗（1∶2 000），室温摇床振荡1h，TBST洗涤3次，加入ECL发光液后用X光片曝光。

1.4 RT－PCR检测细胞因子信号抑制因子（suppress of cytokine signaling，SOCS）的转录 采用2mmol／L NaB和100U／mL IFN－γ同时处理CNE2细胞6h，Trizol抽提总RNA；……