周 进，方 丽，姚文秀，熊竹娟，周 详，周 行，谢 华

（1.四川省肿瘤医院肿瘤内科，成都 610041；2.成都医学院第一附属医院消化内科，成都 610500）

恶性肿瘤是目前的医学难点。传统的治疗手段包括手术、放疗、化疗以及最近新兴的生物靶向治疗。然而，对于化学治疗来说，尽管药物众多，但强烈的不良反应限制了许多联合方案的运用，迫切需要寻找高效低毒的抗肿瘤新型药物。近年来，天然植物提取物——小分子黄酮类受到研究者们的强烈关注。黄酮类主要包括了姜黄素、槲皮素和厚朴等。他们存在广泛，体外及动物实验研究表明其能抑制子宫内膜癌、前列腺癌、结肠癌、鼻咽癌、肺癌、白血病等多种恶性细胞生长［1－4］。本课题研究拟通过生长抑制试验及划痕检测，观察槲皮素对人肝癌细胞（human hepatocellular carcinoma cell lines，HepG2）生物学行为的影响，并对其机制进行初步探讨。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 槲皮素100mg（批号：051K1225）购自Sigma公司。使用时经二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）溶解，Dulbecco最低必需培养基（Eagle′s minimum essential medium，DMEM）培养基稀释成所需浓度，其中DMSO终浓度小于0.1%。胎牛血清、DMEM培养基购自Gibco公司；胰蛋白酶（Tyrisin）购自Promega公司，HepG2细胞由四川大学生物治疗国家重点实验室留存。

1.2 HepG2细胞生长形态学观察 复苏冻存的HepG2细胞，于5%CO2、37%湿度的孵箱中培养。倒置显微镜（Olympus）对槲皮素作用前、后HepG2细胞的生长速度、形态、悬浮细胞比例进行比较、评估。

1.3 生存抑制实验［3－（4，5－dimethyl－2－thiazolyl）－2，5－diphenyl－2H－tetrazolium bromide，MTT］ HepG2细胞生长至对数期，胰蛋白酶消化，以104个／每孔的密度接种于96孔培养板，每孔体积约200μL。继续培养24h，依次加入浓度为10、20、50、100和200μmol／L的槲皮素稀释液，以含0.1%DMSO的DMEM培养基为空白对照，分别培养24、48和72h。……