许兰娇 洪智敏 司 微 刘宝生 张锦华 刘思国 黎观红＊

（1.江西农业大学动物科技学院，南昌330045；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，哈尔滨150001）

鸡 β－ 防 御 素 －9（chickenβ－defensin－9，AvBD9）是鸡天然免疫的重要组成部分，广泛分布于皮肤、消化道及呼吸道等黏膜，在鸡的免疫防御系统中发挥重要作用。AvBD9具有很强的杀灭致病细菌和真菌活性，而且AvBD9在高盐浓度（150mmol/L NaCl）条件下对许多致病菌仍具有杀菌活性［1］。天然存在的抗菌肽产量很低，无法从动植物体内大量提取。AvBD9作为一种家禽基因编码的阳离子抗菌肽，其分子质量小，易被蛋白酶降解，而且对宿主菌大肠杆菌（Escherichia coli）有毒性，因而不能在大肠杆菌中直接表达，并且免疫原性较弱，单独免疫新西兰大白兔不能激起较强的免疫应答［2－4］，而以融合蛋白形式表达则可克服这些困难。国内外学者对鸡β－防御素在鸡各种组织及消化道的分布表达进行了大量研究，表明AvBD9广泛分布于鸡组织中且具有组织特异性表达特点［5－9］。然而，研究者对 AvBD9在组织中分布表达的研究仅限于在基因（mRNA）水平上研究。因此，为从蛋白质水平上鉴定AvBD9在组织中的合成和分布，AvBD9抗体的制备就显得非常必要。本研究旨在利用原核系统表达AvBD9重组蛋白制备兔源多克隆抗体，为AvBD9的检测及相关研究提供支持。

1 材料与方法

1.1 试验动物、菌株及质粒

2.5kg雌性新西兰大白兔2只，购自哈尔滨兽医研究所动物实验中心。大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞由哈尔滨兽医研究所细菌室提供，原核质粒pGEX－6P－1购自美国GE公司。……