贾春红 李淑芳 张继东

(广东海洋大学农学院，广东湛江 524088)

腐败希瓦氏菌和海藻希瓦氏菌是人类的病原菌之一，能够感染人引起脾脓肿［1］、软组织感染［2］以及椎间盘炎［3］等多种疾病，同时也可以引起水产动物发病，给养殖业造成经济损失。近几年以来国内相继发现希瓦氏菌属细菌感染大黄鱼［4］、大菱鲆［5］、异育银鲫［6］等水产动物的研究报道，但是关于这类疾病防治的报道很少。本文研究了3株方斑东风螺病原希瓦氏菌对35 种抗菌药物的敏感性，为抗生素防治希瓦氏菌属细菌引起的水产动物细菌性疾病提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试药敏纸片

35 种常用药敏纸片，购自杭州天和微生物试剂有限公司。

1.1.2 供试菌株及制备

腐败希瓦氏菌、鲍鱼希瓦氏菌和海藻希瓦氏菌共3 株，从广东某养殖场患病的方斑东风螺体内分离。经复壮、纯化后，接种到含3.5%Nacl的营养肉汤中，35℃培养18～24h，供试。

1.1.3 培养基

3.5%Nacl 普通营养肉汤，MH 琼脂，均按常规方法制备。

1.2 方法

采用K－B 法。用灭菌的棉签蘸取菌液少许，以下滴液为宜，均匀涂于MH 琼脂平板上，待干后，用灭菌镊子分别取药敏纸片均匀贴于MH 琼脂培养基表面，并用镊子轻按纸片中心，使其附着严密。将贴好纸片的平板倒置培养，35℃培养18～24h 取出平板，用毫米测微尺测定抑菌圈直径。根据药物纸片周围有无抑菌圈及抑菌圈直径大小来判断供试菌株对各种药物的敏感程度，可分为敏感、中介和耐药3 种。

2 结果

2.1 腐败希瓦氏菌对35 种常用抗菌药物的敏感

性试验结果

腐败希瓦氏菌对大观霉素、氯霉素、头孢吡肟、诺氟沙星、链霉素、复方新诺明敏感;对环丙沙星、红霉素、四环素、左氟沙星、克拉霉素、米诺环素、头孢呋辛、氨曲南、头孢噻肟、氧氟沙星、卡那霉素、庆大霉素、多粘菌素B 中介;对其它药耐药，见表1。

表1 腐败希瓦氏菌对35 种常用抗菌药物的敏感性试验结果

2.2 鲍鱼希瓦氏菌对35 种常用抗菌药物的敏感性试验结果

鲍鱼希瓦氏菌对头孢吡肟、大观霉素、头孢噻肟、氨曲南、头孢他啶、头孢西丁、头孢曲松、红霉素、哌拉西林、头孢哌酮、米诺环素、克拉霉素、多粘菌素B、妥布霉素、庆大霉素敏感;对头孢呋辛、呋喃妥因、环丙沙星、卡那霉素、左氟沙星、氧氟沙星中介;对其它药耐药，见表2。

表2 鲍鱼希瓦氏菌对35 种常用抗菌药物的敏感性试验结果

2.3 海藻希瓦氏菌对35 种常用抗菌药物的敏感性试验结果

海藻希瓦氏菌对大观霉素、头孢吡肟、氨曲南、环丙沙星、头孢噻肟、头孢曲松、红霉素、氧氟沙星、左氟沙星、头孢他啶、头孢呋辛、氯霉素、哌拉西林、克拉霉素、诺氟沙星、米诺环素、复方新诺明、链霉素、呋喃妥因、庆大霉素、多粘菌素B 敏感;对头孢西丁、头孢哌酮、四环素、妥布霉素、卡那霉素、万古霉素中介;对其它药耐药，见表3。

表3 海藻希瓦氏菌对35 种常用抗菌药物的敏感性试验结果

3 讨论

(1)试验结果显示，腐败希瓦氏菌对大观霉素、氯霉素、头孢吡肟、诺氟沙星、链霉素、复方新诺明6 种抗菌药物敏感，与吕俊超［5］报道的对氯霉素和复方新诺明不敏感，对氟哌酸敏感不一致，却与林克冰［4］报道的相一致，可能与分离的菌株有关。秦蕾［6］报道对链霉素耐药，也与本试验不一致，可能与产生耐药性有关。因此，在选择用药时要根据药敏试验选择敏感性药物，避免浪费。

(2)试验结果显示，鲍鱼希瓦氏菌对头孢吡肟、大观霉素、头孢噻肟、氨曲南、头孢他啶、头孢西丁、头孢曲松、红霉素、哌拉西林、头孢哌酮、米诺环素、克拉霉素、多粘菌素B、妥布霉素、庆大霉素敏感。目前，关于鲍鱼希瓦氏菌对抗生素的敏感性报道还很少，本研究为以后防治由鲍鱼希瓦氏菌引起的疾病提供参考。

(3)试验结果显示，海藻希瓦氏菌对大观霉素、头孢吡肟、氨曲南、环丙沙星、头孢噻肟、头孢曲松、红霉素、氧氟沙星、左氟沙星、头孢他啶、头孢呋辛、氯霉素、哌拉西林、克拉霉素、诺氟沙星、米诺环素、复方新诺明、链霉素、呋喃妥因、庆大霉素、多粘菌素B 21 种抗菌药物敏感。说明海藻希瓦氏菌的抗菌谱较广，其对抗革兰氏阴性菌的抗菌药物都比较敏感。Melanie Gressier［3］报道给感染海藻希瓦氏菌的椎间盘炎的病人注射阿米卡星和头孢曲松钠2d，再口服环丙沙星12w，可以康复，但是本试验却发现海藻希瓦氏菌对阿米卡星耐药，可能与使用的药敏纸片有关，也有可能与在试验时培养基的厚度有关。张彩芳等［7］报道配制药敏培养基要选择合适的琼脂及恰当的琼脂浓度;琼脂平板厚应为4.0mm，最大允许差异±1.0mm。因此，试验时要严格按照K－B 法的要求进行，减少人为因素对试验结果的影响。

［1］Norwani Basir，Alice Moi Ling Yong，Vui Heng Chong.Shewanella putrefaciens，a rare cause of splenic abscess［J］.Journal of Microbiology，Immunology and Infection，2012，45:151－153.

［2］N.Rouzic，G.Hery－Arnaud，S.Jaffuel，et al.Soft tissue infection associated with bacteremia caused by Shewanella putrefaciens［J］.Pathologie Biologie，2012，60:e27–e29.

［3］Melanie Gressier，Didier Mbayo，Herve Deramond，et al.First case of human spondylodiscitis due to Shewanella algae［J］.International Journal of Infectious Diseases，2010，14S:e261–e264.

［4］林克冰，周宸，刘家富，等.海水网箱养殖大黄鱼病原菌研究［J］.海洋科学，1999，4:58－62.

［5］吕俊超.养殖大菱鲆病原菌的分离鉴定组织病理学及免疫组织化学［D］.山东:中国海洋大学硕士论文，2008.

［6］秦蕾，张晓君，毕可然.一种新的异育银鲫病原－腐败希瓦氏菌［J］.微生物学报，2012，52(5):558－565.

［7］张彩芳，张爱君.纸片扩散法药敏试验条件的选择［J］.宁夏医学杂志，2006，28(16):946－947.