闫西刚， 贡志刚， 张荣俊， 兰 青

近年来对BMSCs体外诱导分化的研究已经取得了极大的进展，但有关分化机制的许多问题仍没有解决，特别是有哪些基因参与了诱导分化的调控，每种基因在调控中起到何种作用等一系列问题仍没有得到解决。为了在基因水平上进一步研究BMSCs诱导分化的机制问题，本实验借助Affymetrix基因芯片对BMSCs分化过程中的基因表达情况进行研究，试图找出与神经元分化密切相关的基因，一方面从分子水平验证其向神经元分化的能力;另一方面也为BMSCs的基因工程改造提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 动物与材料 动物:成年近交系Wistar大鼠(＞36代)，雌雄不限，体质量约300克/只(中国科学院上海实验动物中心提供)。试剂:DMEM(Gibco公司)、F12(Gibco公司)、胎牛血清(FBS，杭州四季青公司)、淋巴细胞分离液(密度为1.077g/L，上海试剂二厂)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor bFGF，Sigma公司)、表皮生长因子(epidermal growth factor EGF，Peprotech公司)、山羊血清(PAA公司)、Triton-X-100(Sigma公司)、联脒二苯吲哚(DAPI，Sigma公司)、兔抗CD44抗体(武汉博士德生物工程有限公司)、小鼠抗兔CD45单克隆抗体(Caltag公司)、兔抗β-Tubulin III抗体(Corance公司)、兔抗GFAP抗体(DAKO公司)、Alexa Fluor 488标记羊抗兔IgG(Molecular Probes公司)、Cy3标记羊抗小鼠IgG(Dianova公司)。仪器:CO2细胞培养箱(ESPEC BNA-311)、倒置相差显微镜(XDS-1B)、激光共聚焦显微镜(Ziess LSM410);Affymetrix U133 plus 2.0基因表达谱芯片(上海生物芯片有限公司提供)。

1.2 方法

1.2.1 关于BMSC BMSC的取材、细胞培养、诱导分化及免疫细胞化学鉴定详见文献报告［1］。

1.2.2 总RNA的提取和基因芯片杂交 按Trizol试剂盒说明采用一步法从组织样本中抽提总RNA，RNeasy Mini Kit进行纯化。抽提的 RNA用1%的DEPC溶解后在紫外分光光度仪下测定RNA的浓度和纯度，同时凝胶电泳检测RNA有无降解。……