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光动力疗法抑制兔耳增生性瘢痕形成的实验研究*

2013-08-06西安交通大学医学院第二附属医院皮肤科西安710004袁景奕王秀莹董颖颖张鼎伟

陕西医学杂志 2013年7期

西安交通大学医学院第二附属医院皮肤科 (西安710004) 王 琼 袁景奕 王秀莹 董颖颖 张鼎伟

增生性瘢痕(HS)是一种顽固的皮肤病,目前常用的各种治疗方法并不理想,还会产生不同程度的不良反应[1,2]。光动力疗法(PDT)广泛应用于各种肿瘤性疾病和皮肤病,并且不会产生显著的不良反应[3]。基质金属蛋白酶(MMPs)和金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)对细胞、血管、组织具有复杂的调节作用。因此我们提出PDT的作用机理与调节 MMPs/TIMPs的平衡有关,拟使用不同浓度的5-氨基酮戊酸(ALA)-PDT对兔耳HS模型进行干预,观察其对皮损外观、组织病理的影响。同时检测标本中 MMP-2、3、9及TIMP-1蛋白的表达和β-半乳糖苷酶(β-gal)浓度,初步探讨PDT对的HS的治疗作用机制。

材料与方法

1 材料与试剂

1.1 主要仪器试剂:XD-635AB型光动力激光治疗仪和ALA购自中国上海复旦张江生物医药股份有限公司。RNA抽提试剂盒Rneasy kit购自德国Qiagen公司。荧光定量RT-PCR分析仪、SYBR green与Taq-DNA聚合酶混合试剂LightCycler均购自瑞士Roche公司。β-gal酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒购自美国santa cruz公司。

1.2 实验动物:选择新西兰大耳白兔10只,雌雄不限,质量2.0-2.5kg,饲养环境22±2℃,12h昼夜循环。参照Kloeters等的方法建立兔耳HS模型[4]。

2 实验方法

2.1 实验分组:将形成的HS随机分为5组,造模后第3周进行ALA-PDT干预:①20%ALA组局部使用ALA溶液浓度236mg/ml;②10%ALA组使用溶液浓度118mg/ml;③直接照射组(Dr)不使用ALA溶液;④无任何处理的阴性对照组(Neg);⑤选取阴性对照组兔耳正常皮肤组织作为正常对照组(Nor)。具体方法:用配好的ALA药液浸湿医用药棉,覆盖于创面,封包3h后进行激光照射,设置为光斑1.0cm,时间20min,能量密度114.6J/cm2。于瘢痕形成后每周处理1次,总共4次。……

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