陕西中医学院第二附属医院血液科 （咸阳712000） 杨 艳 王越月 何春玲 田亚宁周智辉 张云志 闫昱江 张 杨 刘 芳 梁漫 董红保 董昌虎

细胞周期素D1（Cyclin D1）是细胞周期G1期周期素家族最重要的成员，其表达失控将引起细胞增殖周期失调，而导致肿瘤发生；现已发现，多种组织来源的肿瘤均有Cyclin D1的过度表达，但有关急性白血病（AL）骨髓组织中该蛋白的研究很少；本实验通过免疫组化染色方法，检测Cyclin D1单克隆抗体在急性白血病及正常对照组骨髓组织中的表达，并结合急性白血病的临床分型，探讨Cyclin D1在急性白血病发生、发展及预后中的作用。

资料与方法

1 一般资料 本院2010年1月1日至2012年6月30日确诊为急性白血病49例患者的骨髓组织标本，其中男27例，女22例，年龄16～76岁，中位年龄48岁；急性髓细胞白血病36例（其中3例由骨髓增生异常综合征转变而来、2例由慢性髓细胞白血病急变而来），急性淋巴细胞白血病13例；49例患者中29例为初诊患者，13例为复发患者，7例完全缓解患者。正常对照组19例，来自陕西中医学院第二附属医院病理科诊断的正常骨髓组织。

2 方法及步骤 取经冷丙酮固定、塑料包埋的存档骨髓组织块，制成2～3μm组织切片，裱片于用稀释多聚－L－赖氨酸处理的载玻片上，吹干，用专用油笔圈定玻片上的待测组织区域，PBS液冲洗后滴加100μl Cyclin D1抗体（兔抗人单克隆抗体，福建迈新生物科技有限公司，批号：120510541B），室温下孵育60 min后PBS液冲洗，加100μl酶标羊抗小鼠/兔Ig G聚合物，室温下孵育15 min，PBS液冲洗后加100～200μl新鲜配制的DAB显色液，室温下孵育3～5 min，自来水冲洗，加苏木素染色至细胞核浅蓝色，PBS液冲洗返蓝；……